BDNF对鼠视网膜Miiller细胞GLAST和GS调控作用的研究

发布时间：2018-11-23 06:22

【摘要】：目的研究BDNF对正常氧状态下的鼠视网膜Miiller细胞谷氨酸转运体GLAST和谷氨酰胺合成酶GS表达及功能的调控作用。方法取出生3-7天的新生昆明小鼠视网膜组织进行正常氧状态下Muller细胞培养,取传代后第三代Muller细胞进行后续实验。实验分为BDNF干预组：鼠视网膜Muller细胞分别加入50、75、100、125和150ng/ml的BDNF培养24h；正常对照组：培养的Muller细胞中不加BDNF。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Muller细胞GLAST及GSmRNA的表达；采用Western blot(?)阳免疫细胞化学染色方法检测Muller细胞GLAST及GS蛋白质的表达；采用L-[3,4-H3]-谷氨酸检测100ng/ml的BDNF干预组与正常对照组Muller细胞对谷氨酸的摄取功能的差异。结果不同浓度的BDNF均能上调GLAST及GS的表达(P0.05),并且随着BDNF浓度的增大,GLAST及GS的表达量增加,当BDNF浓度为100ng/ml时,GLAST及GS表达最强。免疫细胞化学染色显示GLAST蛋白主要定位于Muller细胞胞浆及胞膜上,GS蛋白主要定位于Muller细胞胞浆中。不同浓度的BDNF作用于Muller细胞后,GLAST及GS蛋白表达增强。100ng/ml的BDNF能够明显增加Muller细胞对谷氨酸的摄取(P0.05)。结论在正常氧状态下,BDNF能够上调Muller细胞中GLAST和GS的表达,并且增加Muller细胞对细胞外谷氨酸的摄取。目的研究缺氧对鼠视网膜Muller细胞谷氨酸转运体GLAST和谷氨酰胺合成酶GS表达及功能的影响。方法采用出生3-7天的小鼠视网膜组织进行Muller细胞培养,采用125μmol/L的氯化钴(CoCl2)溶液分别进行缺氧干预6h、12h、24h、48h和72h；不加CoCl2溶液培养的Muller细胞为正常对照组。采用RT-PCR方法检测Muller细胞GLAST及GS mRNA的表达；采用Western blot和免疫细胞化学染色方法检测Muller细胞GLAST及GS蛋白质的表达；采用L-[3,4-H3]-谷氨酸检测CoCl2溶液缺氧干预组与正常对照组Muller细胞对谷氨酸的摄取功能的差异；采用Annexin Ⅴ-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡情况。结果缺氧早期GLAST表达较正常对照组明显增强(P0.001),CoCl2溶液干预12h后达到最强(P0.05),之后逐渐降低,CoCl2溶液干预72h后GLAST表达与正常对照组相比无明显差异(P0.05)。缺氧也使GS的表达较正常对照组增加(P0.001),CoCl2溶液干预48h后GS表达最强(P0.001),之后开始下降。缺氧促进Muller细胞对谷氨酸的摄取,CoCl2溶液干预48h后L-[3,4-H3]-谷氨酸的摄取量最大(P0.005),之后开始下降。而CoCl2溶液干预后,Muller细胞死亡数较正常对照组无明显差异(P0.05)。结论在一定时间范围内缺氧能够上调Miiller细胞GLAST及GS的表达,增加谷氨酸的摄取。但持续缺氧最终会引起Muller细胞功能失代偿,从而导致谷氨酸的代谢能力降低。目的研究BDNF对缺氧状态下鼠视网膜Muller细胞谷氨酸转运体GLAST和谷氨酰胺合成酶GS表达及功能的调控作用。方法采用出生3-7天的小鼠视网膜组织进行Muller细胞培养,采用125μmol/L的CoCl2溶液干预72h,同时采用100ng/ml的BDNF分别干预24h、48h、72h和96h；采用125μmol/L的CoCl2溶液干预72h的Muller细胞为缺氧对照组；不加CoCl2溶液及BDNF的Muller细胞为正常对照组。采用RT-PCR方法检测Muller细胞GLAST及GS mRNA的表达；采用Western blot和免疫细胞化学染色方法检测Muller细胞GLAST蛋白质的表达；采用L-[3,4-H3]-谷氨酸检测CoCl2溶液缺氧干预组与正常对照组Muller细胞对谷氨酸的摄取功能的差异；采用Annexin Ⅴ-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡情况。结果与缺氧对照组及正常对照组相比,CoCl2缺氧干预后加入BDNF干预各组(24h、48h、72h),GLAST及GS的表达上调(P0.05),其中以CoCl2缺氧干预72h,BDNF干预48h组GLAST及GS表达最强(P0.05)。然而,CoCl2缺氧干预72h,BDNF干预96h组,GLAST及GS的表达与缺氧对照组及正常对照组无明显差异(P0.05)。CoCl2缺氧干预后加入BDNF干预各组(24h、48h、72h)与缺氧对照组及正常对照组相比,Muller细胞对谷氨酸的摄取量增加(P0.05),以CoCl2缺氧干预72h,BDNF干预48h组谷氨酸的摄取量最大(P0.05)。加入CoCl2溶液及BDNF干预后,Muller细胞死亡数较正常对照组无明显差异(P0.05)。结论BDNF能够上调缺氧状态下视网膜Muller细胞GLAST及GS的表达,并增加Muller细胞对细胞外谷氨酸的摄取。
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【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R774.1

【参考文献】