血红蛋白载氧体在大鼠视网膜慢性低灌注损伤中对视网膜的保护作用

发布时间：2019-08-06 07:38

【摘要】：目的：视网膜慢性低灌注损伤是许多临床眼科疾病的病理生理基础,是导致患者视力障碍甚至失明的主要原因,目前尚无疗效肯定的药物来预防或治疗慢性低灌注导致的视网膜损伤。血红蛋白载氧体(Hemoglobin-based oxygen carriers, HBOCs)为血红蛋白分离纯化修饰的新型血液代用品,该产品直径仅为5-100nm,易于通过狭小的微血管,其半衰期长,具有更强的氧和二氧化碳转运能力,从而较好地解决了缺血组织的供氧问题,其在缺血性损伤疾病中的作用得到越来越多的关注。本文通过对大鼠进行双侧颈总动脉结扎(Bilateral occlusion of the common carotid arteries,2VO)造成视网膜慢性低灌注损伤模型,探讨血红蛋白载氧体对视网膜慢性低灌注损伤的保护作用以及其可能的作用机制,为其今后在缺血性眼病中的应用提供实验和理论依据。方法：成年雄性SD大鼠246只随机分为3组。①2VO组：行双侧颈总动脉结扎；②HBOCs干预组：行双侧颈总动脉结扎后,每天鼠尾静脉注射2%浓度的血红蛋白载氧体1ml；③假手术组。分别于造模后4d、8d、16d三个时间点处死实验动物,应用HE染色法观察低灌注损伤后各时间点大鼠视网膜生理结构与形态变化,测量各组大鼠视网膜厚度,并用免疫组织化学染色法观察各组大鼠视网膜神经节细胞存活和凋亡情况、HIF-1α口Caspase-3的阳性蛋白表达情况；应用real time PCR技术检测各组大鼠视网膜HIF-1α、Bax和Bcl-2的mRNA表达,及Bax/Bcl-2的比值变化；通过TUNEL染色检测各组大鼠视网膜各核层的凋亡水平；造模后第8d每组随机选择5只大鼠行视觉电生理检测,观察每组大鼠ERG标准混合反应b波波幅变化。结果：1、HE染色和免疫组化染色结果显示,各时间点2VO组大鼠视网膜厚度与对应的sham组相比萎缩变薄,各层视网膜结构紊乱。而经HBOCs后的实验组大鼠视网膜厚度及结构无明显变化。 2、免疫组化视网膜神经节细胞Brn-3a特异性染色结果显示各时间点2VO组大鼠神经节细胞数量减少,而HBOCs干预组的大鼠视网膜神经节细胞与假手术组相比无明显变化,HIF-1α和Caspase-3染色结果显示HBOCs的干预可以明显降低HIF-1α和Caspase-3阳性蛋白表达水平。real time PCR检测发现2VO组的HIF-1α、Bax和Bcl-2的mRNA表达水平增高,Bax/Bcl-2的比值也高于假手术组,HBOCs组大鼠HIF-1α、Bax和Bcl-2的mRNA表达水平与假手术组相比无明显差别。TUNEL染色结果显示各时间点2VO组大鼠各核层凋亡水平均高于假手术组,而HBOCs(?)预可以明显降低视网膜各核层的凋亡水平。观察造模后8d三组大鼠ERG检查b波波幅变化,2VO组大鼠b波低平,而经HBOCs干预后b波波幅恢复到正常水平。结论：双侧颈总动脉结扎所致的视网膜慢性低灌注模型可以造成视网膜缺血缺氧、神经节细胞的凋亡及视网膜功能受损,HBOCs可以通过缓解缺血视网膜的乏氧状态防止缺氧对视网膜组织造成的损伤,有效抑制了慢性低灌注损伤所致的各层视网膜的凋亡,保护了缺血视网膜的功能。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R774.1

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