应用硫酸软骨素保存角膜行穿透性角膜移植效果观察

发布时间：2019-08-20 09:22

【摘要】：目的 研究硫酸软骨素（CS）在甘油冷冻保存角膜中对角膜内皮细胞（CECs）的保护作用，并与透明质酸钠（SH）比较，探索不同条件下保存的角膜行穿透性角膜移植术后的效果，为临床角膜保存和角膜移植的应用提供实验依据。 方法 获取40只Wistar雌性大鼠80只角膜片采用随机数字法随机分为4组：正常对照组、硫酸软骨素组(Ⅰ组)、透明质酸钠组(Ⅱ组）、单纯甘油组(Ⅲ组），对照组为新鲜角膜，不保存直接行下一步实验，Ⅰ组和Ⅱ组分别在内皮面黏附1%CS和1%SH后放入甘油中冷冻保存，Ⅲ组角膜直接装入甘油中冷冻保存。2个月后，对所有保存的角膜片行CECs台盼兰-茜素红染色检测活性率，电镜观察超微结构，并行同种异体穿透性角膜移植术（PKP），裂隙灯显微镜记录各组大鼠角膜排斥反应指数（RI）和植片存活时间（MST）、苏木精-伊红染色观察移植术后植片新生血管和淋巴细胞浸润程度，免疫组化法检测术后第14d植片中转化生长因子β1（TGF-β1）和细胞间黏附因子-1（ICAM-1）的表达水平，以进一步检验各组移植术后的效果。 结果 正常对照组大鼠角膜片CECs结构正常，未见到蓝染细胞，CS处理组偶见细胞蓝染，SH处理组和单纯甘油组蓝染CECs数增加。与CS处理组比较，SH处理组和单纯甘油组的细胞密度和活性率均明显下降，差异均有统计学意义（P＜0.05）。CECs超微结构观察显示，CS处理组仅表现为内质网的轻度肿胀，而SH处理组和单纯甘油组细胞内质网肿胀程度较重。CS处理组术后14d时植片淋巴细胞浸润及新生血管明显少于SH处理组和单纯甘油组。临床评分表明，与SH处理组和单纯甘油组比较，CS处理组的RI明显降低而MST明显延长，差异均有统计学意义（P＜0.05）。免疫组织化学显示，CS处理组植片中TGF-β1的表达量明显高于SH处理组和单纯甘油组（P＜0.05），而ICAM-1的表达量低于SH处理组和单纯甘油组（P＜0.05），CS处理组植片中TGF-β1和ICAM-1的表达量接近于对照组表达水平。 结论 CS对甘油冷冻保存的CECs具有保护和稳定作用，能显著增强甘油冷冻保存的效果，应用在动物穿透性角膜移植手术中可获得良好的术后效果并优于SH；CS应用于角膜长期保存，将为临床角膜移植手术提供更为优质的供体材料。
【图文】：

图 1 对照组保存后 CECs 染色 图 2 CS 组保存后 CECs 染色（×200） （×200）正常对照组染色后可见细胞呈规则 CS 组细胞形态正常，，多呈规则六边六边形，边界清晰，细胞连接紧密， 形，边界清晰，细胞连接紧密，个未见细胞核蓝染。 别细胞质膜破裂及核蓝染。

CS组保存后CECs染色（×200）（×200）
【学位授予单位】：辽宁医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R779.65

【参考文献】

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本文编号：2528524