骨髓间充质干细胞移植对氧诱导视网膜病变新生大鼠视网膜新生血管的影响

发布时间：2019-11-18 14:02

【摘要】：目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)移植对氧诱导视网膜病变(OIR)新生大鼠视网膜新生血管的影响,并观察视网膜缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的变化,为BMSC临床治疗OIR提供可靠的理论依据。方法将72只7日龄Sprague-Dawley新生大鼠随机分为正常对照组、模型组(OIR组)与BMSC移植组(BMSC组)。体外培养BMSC,采用氧诱导法制成OIR模型,持续高氧5 d后,BMSC组行玻璃体内注射大鼠BMSC。移植后7 d,采用视网膜铺片法、苏木精-伊红染色(HE)法检测BMSC移植对OIR新生大鼠视网膜新生血管的影响;免疫组化法结合Western blot法观察BMSC对OIR新生大鼠视网膜HIF-1α及VEGF蛋白表达的影响。结果视网膜铺片结果示正常对照组视网膜血管排列整齐,而OIR组血管排列紊乱,可见大片无灌注区,BMSC组仅可见大血管稍迂曲,血管排列较规整,无灌注区明显减少;HE染色发现OIR组视网膜内界膜可见大量新生血管及视网膜前新生血管细胞(Pre-RNC),BMSC组视网膜内界膜新生血管明显减少,且pre-RNC数显著少于OIR组(P0.01);免疫组织化学结果示OIR组HIF-1α阳性与VEGF阳性细胞数显著多于正常对照组,而BMSC组HIF-1α阳性与VEGF阳性细胞数均显著少于OIR组(P0.05)。Western blot结果示OIR组HIF-1α与VEGF蛋白表达显著高于正常对照组,而BMSC组HIF-1α与VEGF蛋白表达显著低于OIR组(P0.01)。结论 BMSC玻璃体内移植可减轻OIR新生大鼠视网膜新生血管的形成,其机制可能与其抑制HIF-1α及VEGF蛋白的表达有关。
【图文】：

α阳性细胞，且显著多于正常对照组（P<0.05）；BMSC组HIF-1α阳性细胞数明显少于OIR组（P<0.05），但仍多于正常对照组（P<0.05）。见表1，图2。表1各组大鼠视网膜HIF-1α阳性与VEGF阳性细胞数比较（x±s，个/mm2）组别nHIF-1α阳性细胞数VEGF阳性细胞数正常对照组89.0±1.325.0±3.2OIR组856.0±2.9a81.0±4.8aBMSC组839.0±2.4a,b53.0±3.9a,bF值858.4388.0P值<0.001<0.001注：a示与正常对照组比较，P<0.05；b示与OIR组比较，P<0.05。视网膜铺片正常对照组OIR组BMSC组苏木精-伊红染色图1各组大鼠视网膜新生血管形成情况比较各组视网膜铺片结果示（×200）：正常对照组可见血管密集，分布均匀；OIR组可见毛细血管闭塞，大片无灌注区，血管较杂乱，分布不均匀；BMSC组血管稍迂曲，无灌注区少于OIR组，新生血管数少于OIR组，血管排列较OIR组整齐。各组苏木精-伊红染色结果示（×400）：正常对照组可见极少量新生血管；OIR组可见较多杂乱的新生血管；BMSC组亦可见新生血管，分布较不均匀，新生血管数较OIR组明显减少，分布较OIR组均匀。箭头所示为新生血管。图2各组大鼠视网膜HIF-1α及VEGF表达结果（免疫组化，×400）HIF-1α阳性细胞核呈棕黄色，VEGF阳性细胞呈棕黄色。正常对照组视网膜偶见极少量HIF-1α阳性及VEGF阳性细胞，OIR组视网膜可见较多的HIF-1α阳性及VEGF阳性细胞，BMSC组视网膜可见HIF-1α阳性及VEGF阳性细胞，，但明显少于OIR组。HIF-1αVEGF正常对照组OIR组BMSC组

第19卷第11期2017年11月中国当代儿科杂志ChinJContempPediatrVol.19No.11Nov.2017·1205·2.3各组大鼠视网膜HIF-1α、VEGF免疫组织化学结果免疫组织化学结果示HIF-1α阳性细胞核染为棕黄色，正常对照组视网膜仅见少量HIF-1α阳性细胞；OIR组可见大量HIF-1α阳性细胞，且显著多于正常对照组（P<0.05）；BMSC组HIF-1α阳性细胞数明显少于OIR组（P<0.05），但仍多于正常对照组（P<0.05）。见表1，图2。表1各组大鼠视网膜HIF-1α阳性与VEGF阳性细胞数比较（x±s，个/mm2）组别nHIF-1α阳性细胞数VEGF阳性细胞数正常对照组89.0±1.325.0±3.2OIR组856.0±2.9a81.0±4.8aBMSC组839.0±2.4a,b53.0±3.9a,bF值858.4388.0P值<0.001<0.001注：a示与正常对照组比较，P<0.05；b示与OIR组比较，P<0.05。视网膜铺片正常对照组OIR组BMSC组苏木精-伊红染色图1各组大鼠视网膜新生血管形成情况比较各组视网膜铺片结果示（×200）：正常对照组可见血管密集，分布均匀；OIR组可见毛细血管闭塞，大片无灌注区，血管较杂乱，分布不均匀；BMSC组血管稍迂曲，无灌注区少于OIR组，新生血管数少于OIR组，血管排列较OIR组整齐。各组苏木精-伊红染色结果示（×400）：正常对照组可见极少量新生血管；OIR组可见较多杂乱的新生血管；BMSC组亦可见新生血管，分布较不均匀，新生血管数较OIR组明显减少，分布较OIR组均匀。箭头所示为新生血管。图2各组大鼠视网膜HIF-1α及VEGF表达结果（免疫组化，×400）HIF-1α阳性细胞核呈棕黄色，VEGF阳性细胞呈棕黄色。正常对照组视网膜偶见极少量HIF-1α阳性及VEGF阳性细胞，OIR组视网膜可见较多的HIF-1α阳性及VEGF阳性细胞，BMSC组视网膜可见HIF-1α阳性及VEGF阳性细胞，但明显少于OIR组。HI

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