膜联蛋白A2在糖基化终末产物诱导的内皮细胞骨架重构及迁移中的作用初探

发布时间：2019-12-05 14:44

【摘要】：目的 1、观察糖基化终末产物对人脐静脉内皮细胞骨架重构、迁移能力的影响 2、观察膜联蛋白A2对糖基化终末产物培养的人脐静脉内皮细胞骨架重构、迁移能力变化的影响 3、观察糖基化终末产物对人脐静脉内皮细胞膜联蛋白A2表达的影响方法第一部分：建立人脐静脉内皮细胞体外培养模型，应用siRNA技术干扰膜联蛋白A2的表达，实验分正常组（葡萄糖浓度为25mmol L~(-1)的高糖型DMEM）、阴性干扰组（controlsiRNA预干扰HUVEC，继用高糖型DMEM）及阳性干扰组（ANXA2siRNA预干扰HUVEC，继用高糖型DMEM），应用Western Blot验证干扰效果。第二部分：实验进一步分正常组（葡萄糖浓度为25mmol L~(-1)的高糖型DMEM）、BSA组（高糖型DMEM，另含0.2g L~(-1)BSA）、AGE-BSA组（高糖型DMEM，另含0.2g L~(-1)AGE-BSA）、阴性干扰组（control siRNA预干扰HUVEC，继用高糖型DMEM，另含0.2g L~(-1)AGE-BSA）及阳性干扰组（ANXA2siRNA预干扰HUVEC，继用高糖型DMEM，另含0.2g L~(-1)AGE-BSA）。应用FITC-鬼笔环肽染色结合荧光显微镜观察各组中细胞骨架排布的变化，划痕法观察各组中细胞迁移能力的变化。第三部分：应用免疫沉淀及Western Blot观察正常组（葡萄糖浓度为25mmol L~(-1)的高糖型DMEM）、BSA组（高糖型DMEM，另含0.2g L~(-1)BSA）及AGE-BSA组（高糖型DMEM，另含0.2g L~(-1)AGE-BSA）中ANXA2及磷酸化ANXA2的表达。应用单因素方差分析LSD法分析上述数据。结果第一部分： Western Blot结果表明转染完成后正常组、阴性干扰组及阳性干扰组ANXA2蛋白的表达量分别为（1.170±0.027）、（1.182±0.037）及（0.676±0.053），前两者之间差异无统计学意义（LSD_(正常,阴性)=-0.013，，P_(正常,阴性)=0.7130.05），阳性干扰组同前两者相比，ANXA2表达量减少有统计学意义（LSD_(正常,阳性)=0.494，P_(正常,阳性)=0.0000.05；LSD_(阴性,阳性)=0.506，P_(阴性,阳性)=0.0000.05）。第二部分：分组处理24h后FITC-鬼笔环肽染色观察正常组、BSA组、AGE-BSA组、阴性干扰组及阳性干扰组细胞骨架，前两者骨架排布无明显差异，应力纤维均匀且稀疏；AGE-BSA组同前两者相比，应力纤维聚集且致密；阴性干扰组同AGE-BSA组相比，骨架排布无明显差异，而阳性干扰组的骨架则回至稀疏均匀排布。分组处理后24h，正常组、BSA组、AGE-BSA组、阴性干扰组及阳性干扰组迁移入划痕内的细胞数分别为（153±12）、（143±16）、（192±8）、（176±6）及（142±14），AGE-BSA组、阴性干扰组同正常组、BSA组及阳性干扰两两相比，有统计学意义增多，余分组间比较均无统计学差异（LSD_(正常, BSA)=10.000，P_(正常, BSA)=0.3310.05；LSD_(正常, AGE-BSA)=-39.000，P_(正常, AGE-BSA)=0.0030.05；LSD_(正常,阴性)=-23.000，P_(正常,阴性)=0.0410.05；LSD_(正常,阳性)=11.667，P_(正常,阳性)=0.2610.05；LSD_(BSA, AGE-BSA)=-49.000，P_(BSA, AGE-BSA)=0.0010.05；LSD_(BSA,阴性)=-33.000，P_(BSA,阴性)=0.0070.05；LSD_(BSA,阳性)=1.667，P_(BSA,阳性)=0.8680.05；LSD_(AGE-BSA,阴性)=16.000，P_(AGE-BSA,阴性)=0.1330.05；LSD_(AGE-BSA,阳性)=50.667，P_(AGE-BSA,阳性)=0.0000.05；LSD_(阳性,阴性)=34.667，P_(阳性,阴性)=0.0050.05)。第三部分：免疫沉淀及Western Blot结果表明，分组处理后，正常组、BSA组及AGE-BSA组总ANXA2蛋白的表达量分别为（1.011±0.014）、（0.939±0.089）及（1.064±0.119），三者之间无统计学差异（F_(ANXA2)=1.596，P=0.2780.05）。而磷酸化ANXA2蛋白的表达量分别为（0.942±0.057）、（0.945±0.032）及（1.118±0.095），前两者比较亦无统计学差异，而AGE-BSA组同前两者比较，有统计学意义增多（LSD_(正常,BSA)=-0.002，P_(正常,BSA)=0.9670.05；LSD_(正常,AGE-BSA)=-0.176，P_(正常,AGE-BSA)=0.0180.05；LSD_(BSA,AGE-BSA)=-0.173，P_(BSA,AGE-BSA)=0.0190.05）。结论 1、糖基化终末产物可促使人脐静脉内皮细胞骨架重构，细胞迁移能力增强。 2、膜联蛋白A2在糖基化终末产物重构细胞骨架，促使细胞迁移过程中发挥作用。 3、膜联蛋白A2可能通过酪氨酸磷酸化发挥上述作用。
【学位授予单位】：济南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R774.1

【参考文献】