脐带间充质干细胞对角膜缘干细胞干性维持和增殖力影响的研究

发布时间：2020-01-26 04:38

【摘要】：目的探讨人源性脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs)能否取代鼠源性3T3成纤维细胞,用于体外扩增角膜缘干细胞(limbal stem cells,LSCs)并维持其干细胞特性。方法体外培养HUCMSCs,并行成脂诱导、成骨诱导,流式细胞术检测HUCMSCs相关标志物CD31、CD45、CD90的表达情况;0ug/ml、1ug/ml、2ug/ml、4ug/ml、6ug/ml、8ug/ml浓度的丝裂霉素C预处理脐带间充质干细胞,MTT法选择能维持HUCMSCs活性稳定的最低药物浓度;原代培养兔LSCs,并与经过丝裂霉素C作用过的HUCMSCs、NIH-3T3细胞共培养,待形成LSCs克隆团后,拍摄并观察各组间LSCs克隆团的形态,计数各培养皿克隆团数目并比较其克隆形成率(CFE);免疫荧光染色法检测并比较各组间LSCs克隆团的ABCB5、IPO13和CK3/12表达情况,从而从维持干细胞特性和增殖力两个方面,研究HUCMSCs能否成为取代鼠源性3T3成纤维细胞的理想滋养层。结果体外培养的HUCMSCs均质性良好,经过成脂和成骨诱导后,该细胞具备分化成脂肪、骨细胞的潜能;HUCMSCs可高表达CD90细胞黏附分子,阳性率为88.2%,不表达造血细胞CD45标志物,阳性率为0.2%,亦不表达内皮细胞标志物CD31,阳性率为0.4%,以上结果均可说明培养的HUCMSCs具备良好的间充质细胞的生物学特性;MTT法检测经过不同浓度丝裂霉素C预处理HUCMSCs后的细胞活性,能维持脐带间充质干细胞活性稳定的最低丝裂霉素C浓度为4ug/ml;与兔角膜缘干细胞共培养8天后,显微镜下可观察到两种饲养细胞均可培养出较大的角膜缘干细胞克隆团,其中3T3饲养组的角膜缘干细胞排列更加致密、紧促,HUMSCs、NIH-3T3饲养组以及无饲养层组LSCs的CFE为(4.10±0.56)%、(4.67±0.76)%、(0.83±0.35)%,各个实验组间存在明显差异(F=37.898,P0.01);脐带间充质干细胞饲养组与NIH-3T3饲养组CFE差异均无统计学意义(t=1.19,P0.05);脐带间充质干细胞、NIH-3T3饲养组与无饲养细胞组间差异均有统计学意义(t=6.87、8.06,均为P0.01)。免疫荧光化学检测两种饲养层LSCs克隆团标志物,ABCB5、IPO13均呈高表达,CK3/12呈低表达,其中3T3饲养组中表达CK3/12的细胞量明显多于脐带间充质干细胞组,其余干细胞标志物表达情况在两饲养组中无显著差异。结论脐带间充质干细胞能扩增兔角膜缘干细胞并维持其干细胞特性,在角膜缘干细胞克隆形成率的形成上及对角膜缘干细胞未分化状态的维持上与3T3饲养组均无差异。相较于3T3饲养层,其促进角膜缘干细胞增殖的能力稍弱,而维持角膜缘干细胞特性的能力则稍强。因此脐带间充质干细胞可以作为替代鼠源性3T3成纤维细胞的理想饲养层体外培养角膜缘干细胞。
【图文】：

细胞形态,成骨

图 1 HUCMSCs 细胞形态 A：第 2 代 HUCMSCs（×100）B：第 4 代 HUCMSCs (×50)AAB图 2 HUCMSCs 成骨、成脂诱导鉴定 A: HUCMSCs 成骨诱导第 20 天（×200） B：HUCMSCs 成脂诱导第 10 天（×400）

成骨,增殖力,间充质干细胞,干性

脐带间充质干细胞对角膜缘干细胞干性维持和增殖力影响的研究附图Photos图 1 HUCMSCs 细胞形态 A：第 2 代 HUCMSCs（×100）B：第 4 代 HUCMSCs (×50)A BA
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R77

【参考文献】