抗人IgM抗体对喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤血管生成的影响及机制研究

发布时间：2020-02-13 18:47

【摘要】：目的：喉癌是来源于喉黏膜上皮组织的恶性肿瘤，最常见的为喉鳞状细胞癌，约占全身恶性肿瘤的5.7%-7.6%，近年来其发病率逐渐增多。目前喉癌的治疗方式仍以手术为主，辅以放、化疗，虽然近年来原有的治疗方法不断改善，但是喉癌的治疗效果仍不理想，其5年生存率并未明显提高。随着各种生物学技术的发展，人们正积极寻找新的治疗方式和新的药物来治疗喉癌。近年来许多学者发现一些上皮来源的恶性肿瘤中存在免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig）的表达，这一现象已成为肿瘤免疫研究的一个热点，并且可能为肿瘤的治疗提供一个新的方向。肿瘤血管生成与肿瘤的发生发展密切相关，而促血管生成因子的表达则是肿瘤血管生成的重要因素。本实验通过研究抗人IgM抗体对喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤微血管密度（microvesseldensity,MVD）以及血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)、肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor，TNF)受体超家族成员CD40蛋白表达的影响，以探讨抗人IgM抗体抗肿瘤血管生成的作用和可能的机制，从而为抗人IgM抗体应用于喉鳞癌的治疗提供理论和实验依据。方法：在本实验小组的前期研究[1]中我们已经成功建立了喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤模型，将15只裸鼠随机分为实验组、IgG对照组和PBS对照组。实验组移植瘤内注射抗人IgM抗体，，1.5mg/只，分五次注射，每3天一次；IgG组移植瘤内注射羊IgG，注射量与注射方法与实验组相同；PBS组移植瘤内注射PBS液，注射量与注射方法与实验组相同。观察裸鼠的生长情况，最后一次用药后3天，处死裸鼠，取出移植瘤体，应用免疫组织化学技术检测各组肿瘤组织中CD31标记的微血管密度（MVD）及VEGF、CD40蛋白表达，并采用图像分析系统检测VEGF及CD40的平均光密度。结果：（1）3组裸鼠移植瘤组织切片经病理检查证实为喉鳞癌，并且在实验期内15只裸鼠全部存活，无一死亡。（2）免疫组织化学SAP法检测裸鼠移植瘤MVD，实验组MVD为（11.33±1.86），IgG对照组为（15.92±2.17），PBS对照组为（16.50±2.35），实验组与两个对照组比较MVD显著下降，经统计学分析差异有统计学意义（P＜0.05）。（3）用免疫组织化学SABC法检测裸鼠移植瘤组织中VEGF、CD40蛋白的表达，实验组VEGF蛋白表达的平均光密度值为（0.216±0.013），IgG对照组为（0.362±0.015），PBS对照组为（0.377±0.018），实验组与两个对照组相比VEGF蛋白表达明显下降，经统计学分析差异有统计学意义（P＜0.05）。（4）实验组CD40蛋白表达的平均光密度值为（0.171±0.013），IgG对照组为（0.233±0.013），PBS对照组为（0.237±0.014），实验组较两个对照组CD40蛋白表达明显下降，经统计学分析差异有统计学意义（P＜0.05）。（5）实验组MVD与VEGF蛋白的表达呈正相关（r=0.713,P=0.009），且MVD与CD40蛋白表达也呈正相关（r=0.791，P=0.006）。IgG组MVD与VEGF蛋白的表达呈正相关（r=0.637,P=0.031），MVD与CD40蛋白表达也呈正相关（r=0.718，P=0.027）。PBS组MVD与VEGF蛋白的表达呈正相关（r=0.729,P=0.035），MVD与CD40蛋白表达也呈正相关（r=0.531，P=0.042）。结论：（1）抗人IgM抗体可以有效抑制人喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤的MVD，即对移植瘤的血管生成有明显的抑制作用。（2）抗人IgM抗体可以抑制人喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤VEGF蛋白表达。（3）抗人IgM抗体可以抑制人喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤CD40蛋白表达。（4）抗人IgM抗体抑制人喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤血管生成的机制可能与抑制VEGF和CD40蛋白表达有关。（5）抗人IgM抗体抑制人喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠成瘤的机制可能与其抑制裸鼠移植瘤血管生成有关。（6）抗人IgM抗体有可能成为喉癌治疗中一个新的药物靶点，对IgM异位表达进行深入研究可以为喉鳞癌预防和治疗提供新的思路和方向。
【图文】：

图 1 实验 组 M VD （ SP × 4 00 ） 图 2 I gG 对 照组 M VD （S P × 4 00 ） Fi g1 Th e e xp r e s s io n of mi c r ov e s se l s i n Fi g2 Th e e xp r e s s io n of mi c r ov e s se l s i ne xp e r im e n t a l gr ou p ( SP × 4 00 ) c on t ro l gr ou p of I g G ( SP × 4 00 ) 图 3 PB S 对照 组 M VD （S P × 4 00 ） 图 4 实验 组 VE G F 表达 （ S P × 4 00 ） Fi g3 Th e e xp r e s s io n of mi c r o ve s se l s i n Fi g4 Th e e xp r e s s io n of VE G F p r ot ei n i nc on t ro l gr ou p of PB S ( SP × 4 00 ) e xp e r im e n t a l gr ou p (S P ×4 00 )

图 1 实验 组 M VD （ SP × 4 00 ） 图 2 I gG 对 照组 M VD （S P × 4 00 ） Fi g1 Th e e xp r e s s io n of mi c r ov e s se l s i n Fi g2 Th e e xp r e s s io n of mi c r ov e s se l s i ne xp e r im e n t a l gr ou p ( SP × 4 00 ) c on t ro l gr ou p of I g G ( SP × 4 00 ) 图 3 PB S 对照 组 M VD （S P × 4 00 ） 图 4 实验 组 VE G F 表达 （ S P × 4 00 ） Fi g3 Th e e xp r e s s io n of mi c r o ve s se l s i n Fi g4 Th e e xp r e s s io n of VE G F p r ot ei n i nc on t ro l gr ou p of PB S ( SP × 4 00 ) e xp e r im e n t a l gr ou p (S P ×4 00 )
【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R739.65

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本文编号：2579221