黄体酮在大鼠视神经损伤再生中的作用研究及对GLT-1和活化P38-MAPK的影响

发布时间：2020-03-14 12:28

【摘要】：目的：视神经损伤的再生和功能恢复是眼科学临床和科研仍亟待解决的难题。近年来的大量研究多集中在药物研究方面,但因疗效局限,或由于明显的副作用而限制了药物应用,使得视神经保护的研究进展缓慢。最近更多的注意力转向研发一种能够通过多种途径发挥促进神经存活和功能恢复的药物。黄体酮是一种重要的性腺类固醇激素,其作用已不仅仅局限在生殖系统的范畴,它可在神经系统合成和分泌,且具有活性作用,可通过多种途径发挥其神经保护作用,例如能够减轻脑损伤中的炎症反应、抑制细胞凋亡、促神经营养因子分泌等等。在脑损伤的治疗中,黄体酮已充分显示了它的神经保护作用,但黄体酮对视神经损伤再生的作用尚不清楚。 本实验通过制作大鼠视神经不完全损伤模型,腹腔注射黄体酮,通过大鼠视网膜HE染色观察形态学改变,免疫组织化学染色半定量检测及阳性细胞计数观察谷氨酸转运体-1(GLT-1)和活化p38-丝裂原活化蛋白激酶(p38-MAPK)的表达变化,旨在对黄体酮对视神经损伤再生的作用及机制进行探讨,以期为黄体酮治疗视神经损伤提供实验依据和理论基础。 方法：清洁级雄性健康SD大鼠80只作为研究对象,体重200g±20g,行外眼及眼底检查无病变者纳入实验,随机分为四组：正常组20只(不做任何处理)；假损伤组20只(只暴露右眼视神经,不夹伤)；损伤1组20只(右眼行视神经不完全损伤处理,伤后即刻给予腹腔注射生理盐水)；损伤2组20只(右眼行视神经不完全损伤处理,伤后即刻给予腹腔注射黄体酮注射液)。按损伤后1天、3天、7天、14天四个时间点随机将各组5只大鼠右眼球摘除,取视网膜组织固定切片,以视盘上方2mm的视网膜组织作为观察对象。HE染色光学显微镜观察视网膜形态学变化,免疫组织化学染色观察视网膜组织中GLT-1及活化p38-MAPK(p-p38)的表达变化,计算机图像分析进行半定量检测平均光密度值(The averageoptical density value, AOD),以免疫阳性染色的AOD来表示抗原表达量,AOD越高则阳性表达越强。高倍光学显微镜(×400)计数表达p-p38的细胞。实验数据采用统计结果以均数±标准差表示,实验数据用SPSS13.0统计软件分析,统计学处理采用多样本均数的单因素方差分析或独立样本T检验,组间比较采用LSD-t检验。 结果： 1视网膜组织HE染色正常组和假损伤组大鼠视网膜视网膜组织结构清晰,主要可见3层细胞核层：神经节细胞核层、内核层及外核层结构,胞核排列密集整齐；损伤1组随着损伤时间延长大鼠视网膜神经节细胞层胞核明显稀疏,排列紊乱,空泡样改变,内核层及外核层不同程度变薄；与损伤1组比较,损伤2组各个时间点大鼠视网膜细胞核排列尚整齐,稀疏程度及空泡改变均较轻,未见明显变薄。 2大鼠视网膜GLT-1免疫阳性表达呈深棕色,主要分布于内丛状层和内核层,正常组和假损伤组AOD各时间点差别不具有统计学意义(P0.05),说明两组的GLT-1表达无差别。损伤1组1天时GLT-1的AOD为0.368+0.033,与正常组差别具有统计学意义(P0.05),较正常组AOD(0.201+0.013)升高,说明损伤1组的GLT-1表达较正常组增加；3天、7天和14天的AOD分别为0.151+0.027、0.106+0.031和0.076±0.020,均较正常组下降(P0.05)。损伤2组1天时GLT-1的AOD为0.461±0.011,与损伤1组的差别具有统计学意义(P0.05),即损伤2组GLT-1的AOD较损伤1组升高,说明损伤2组GLT-1表达较损伤1组增加；3天、7天及14天的AOD分别为0.231+0.021、0.132±0.022和0.103±0.013,均较损伤1组升高,但除3天时较正常组高,7天和14天较正常组下降,说明损伤2组的GLT-1表达多于损伤1组但仍会下降至正常水平以下。 3正常组和假损伤组各个时间点的大鼠视网膜各层均未见p-p38的表达；损伤1组在1天、3天、7天在视网膜视神经节细胞层可见p-p38表达,AOD分别为0.459±0.029、0.324±0.023和0.201±0.024,阳性表达细胞计数为14.2±1.5、8.0±1.6和4.2±0.8(单位：个),均呈逐渐下降趋势,14天均表达阴性。损伤2组1天、3天、7天时可见p-p38的表达,AOD分别为0.339±0.019、0.245±0.014和0.154+0.032,表达p-p38的细胞计数为8.2±1.3、6.4±1.1和3.4±1.2,各时间点AOD和细胞计数与损伤1组的差别均具有统计学意义(P0.05),说明损伤2组p-p38的阳性表达少于损伤1组；14天表达阴性。 结论： 1外伤性视神经损伤后神经节细胞数量减少,细胞排列紊乱,应用黄体酮后细胞紊乱及数量减少的程度均较注射生理盐水组轻,说明黄体酮对外伤性视神经损伤后的视网膜具有保护作用。 2应用黄体酮后视网膜组织中GLT-1的表达均较应用盐水组增强,证明黄体酮能够增加外伤性视神经损伤后视网膜中GLT-1的表达。 3应用黄体酮后视网膜组织中活化p38-MAPK的表达均较应用生理盐水组弱,证明黄体酮能够降低外伤性视神经损伤后视网膜中活化p38-MAPK的表达。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R774.6

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本文编号：2586980