SERPINB6基因表达降低对CNE-1细胞增殖、侵袭及迁移的影响

发布时间：2020-03-27 13:26

【摘要】：目的:本课题的研究目的在于通过干扰SERPINB6基因在鼻咽癌CNE-1细胞中的表达,然后观察该基因表达降低对CNE-1细胞增殖、侵袭及迁移的影响,以及对肿瘤转移蛋白MMP-2活性的影响,并分析它的表达降低在鼻咽癌发生发展过程中的作用,进一步揭示鼻咽癌的发病机制,为临床诊断提供理论依据,也为以SERPINB6作为潜在靶点的NPC基因治疗提供实验依据。方法:1.采用人鼻咽癌CNE-1细胞株作为研究对象进行细胞培养,首先进行预实验,预实验分五组:mock组(空白组A)、N.C-siRNA组(阴性对照组B)和siRNA-SERPNB6-1组(实验组C)、siRNA-SERPINB6-2 组(实验组 D)、siRNA-SERPINB6-3 组(实验组E).2.通过使用普通siRNA经济型套餐,对CNE-1细胞进行SERPINB6的转染小干扰,检测转染率(NC-FAM);实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测5组细胞中SERPINB6的表达情况,并筛选出干扰效果最佳一组,作为后续的正式实验。3.正式实验分三组:mock组(空白组A)、N.C-siRNA组(阴性对照组B)和siRNA-SERPINB6组(实验组C,干扰最佳)。MTT法检测被干扰后的SERPINB6对NPCCNE-1细胞增殖活性的影响;划痕实验检测被干扰后的SERPINB6对NPCCNE-1细胞迁移能力的影响;Transwell侵袭实验检测被干扰后的SERPINB6对NPCCNE-1.细胞侵袭能力的影响。4.WB检测肿瘤转移相关蛋白MPP-2的表达情况。结果:1.在预实验中,转染siRNA后,RT-PCR法检测实验组CDE的SERPINB6相对表达量比阴性对照组和空白组明显下降(P0.05)。转染siRNA3序列即实验组C下降最明显(P0.01),干扰效果最佳,说明本实验成功干扰SERPINB6,故后续实验采用实验组C的siRNA3 序列。2.在正式实验中,每隔24小时用MTT法检测实验组的增殖速度分别是 0.184±0.017、0.278土0.019、0.389±0.023,较阴性对照组和空白组细胞生长增大明显。(P0.05)。3.划痕实验结果示转染了 si-RNA的实验组细胞迁移距离明显快于阴性对照组和空白组。(p0.05)。4.Transwell实验检测实验组5个视野下的侵袭细胞平均值为135,较阴性对照组和空白组进入下层小室的细胞数明显增多,侵袭能力明显增强。(P0.05)。5.Western Blot法显示实验组中MMP-2的蛋白活化水平明显升高,高于阴性对照组和空白组。(P0.05)。结论:1.SERPINB6能够抑制CNE-1细胞的增殖、迁移和侵袭,可为基因治疗提供新的靶点依据。2.外源性转染si-SERPINB6促进CNE-1细胞的迁移与侵袭,肿瘤转移蛋白MMP-2的活化表达水平升高,SERPINB6可能是通过介导MMPS活化参与CNE-1细胞的转移调节。
【图文】：

３．３正式实验：细胞的培养及生长逡逑细胞分组：ＣＮＥ－１＋ｍｏｃｋ组（空白组Ａ）、ＣＮＥ－１＋Ｎ．Ｃ－ｓｉＲＮＡ组（阴性对逡逑照组Ｂ）和ＣＮＥ－】＋邋ｓｉＲＮＡ－ＳＥＲＰ丨ＮＢ６组（实验组Ｃ，干扰最佳）。培养４８ｈ后，逡逑１６逡逑

３．３正式实验：细胞的培养及生长逡逑细胞分组：ＣＮＥ－１＋ｍｏｃｋ组（空白组Ａ）、ＣＮＥ－１＋Ｎ．Ｃ－ｓｉＲＮＡ组（阴性对逡逑照组Ｂ）和ＣＮＥ－】＋邋ｓｉＲＮＡ－ＳＥＲＰ丨ＮＢ６组（实验组Ｃ，干扰最佳）。培养４８ｈ后，，逡逑１６逡逑
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R739.63

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本文编号：2603014