MIR-34A前体宿主非编码RNA翻译功能性蛋白及对鼻咽癌细胞生物学功能的影响

发布时间：2020-04-03 12:15

【摘要】：目的:探究miR-34AHG-133aa在鼻咽癌中的表达情况及对鼻咽癌细胞恶性生物学功能的影响。方法:1.荧光定量聚合酶链式反应(Real-time RT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)法测定MIR-34AHG-133aa在鼻咽癌细胞和组织中的表达情况。2.KM生存分析(Kaplan Meier-plotter)评价MIR34AHG-133aa表达水平与鼻咽癌患者预后(overall survival,OS)的关系,通过Real-time RT-PCR探究MIR34AHG-133aa表达与鼻咽癌患者分期、复发和转移之间的关系。3.慢病毒载体构建外源性稳定过表达MIR34AHG-133aa的鼻咽癌细胞系,通过MTT比色法检测增殖、细胞凋亡实验、划痕实验、transwell侵袭和转移实验、裸鼠成瘤实验、TUNEL检测及免疫荧光实验验证MIR34AHG-133aa在体内外对鼻咽癌细胞增殖、凋亡、侵袭和转移的影响。结果:1.通过对HEK293细胞进行细胞全蛋白质谱检测时,我们发现miR-34a前体宿主RNA(MIR-34AHG)翻译的一个肽段。随后,利用抗体验证的方法证实了该小分子蛋白质的存在,并将其命名为MIR-34AHG-133aa。2.通过Western blot发现,MIR-34AHG-133aa在鼻咽癌细胞CNE1、CNE2、TWO3、C666-1的表达低于正常鼻咽黏膜细胞NP69(P0.01)。Real time RT-PCR结果显示鼻咽癌组织中MIR-34AHG-133aa的表达水平明显低于正常鼻咽黏膜组织(P0.01);鼻咽癌III期患者中MIR-34AHG-133aa表达明显高于IV期患者(P0.01);未发生局部复发的鼻咽癌患者MIR-34AHG-133aa表达水平明显高于发生者(P0.01);同样,未发生远处转移的鼻咽癌患者MIR-34AHG-133aa表达明显高于发生者(P0.001)。KM生存分析结果表明,MIR34A-HG-133a低表达的鼻咽癌患者预后较差(P0.05)。3.构建稳定过表达MIR-34AHG-133aa的鼻咽癌细胞系C666-1,并通过Real time RT-PCR及Western blot对细胞系进行验证。而后通过MTT细胞增殖实验、细胞凋亡、迁移与侵袭实验及裸鼠成瘤实验评估过表达MIR-34AHG-133aa基因对鼻咽癌细胞功能的影响,结果发现过表达MIR-34AHG-133aa的鼻咽癌细胞生长速率较对照组细胞降低(P0.01),且过表达MIR-34AHG-133aa的鼻咽癌细胞迁移穿过滤膜的细胞数量明显少于对照组(P0.01,P0.001),再者,过表达MIR-34AHG-133aa鼻咽癌细胞的凋亡率为12.1%,高于对照组细胞的凋亡率0.23%。结果提示MIR-34AHG-133aa可以明显抑制鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移,促进鼻咽癌细胞的凋亡。4.通过对裸鼠移植瘤瘤体进行TUNEL检测及免疫荧光实验,结果显示接种过表达MIR-34AHG-133aa的鼻咽癌细胞的瘤体的凋亡率大于对照组(P0.05),而caspase-3的表达也明显高于对照组(P0.001),但ki67的表达低于对照组(P0.01),结果提示MIR-34AHG-133aa在体内具有抑制鼻咽癌细胞的增殖且促进鼻咽癌细胞凋亡的作用。结论:1.MIR-34AHG-133aa是miR-34a前体宿主RNA(MIR34AHG)翻译的多肽,在鼻咽癌组织及细胞中表达下调。2.MIR-34AHG-133aa低表达的鼻咽癌患者分期较晚,且预后较差。3.MIR-34AHG-133aa可显著抑制鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移,促进鼻咽癌细胞的凋亡。综上提示,MIR-34A前体宿主非编码RNA翻译功能性蛋白(MIR-34AHG-133aa)可能为鼻咽癌的潜在抑制因子。
【图文】：

eal-time RT-PCR was used to detect the expression of MIR-34AHG-133aa in 8 caryngeal carcinoma and 8 cases of nasopharyngeal inflammatory tissue（P＜0.01）34AHG-133aa 在鼻咽癌细胞中蛋白水平表达下调一步探究 MIR-34AHG-133aa 在鼻咽癌中的表达情况，我印迹（Western blot, WB）法检测了 4 株鼻咽癌细胞株与皮细胞 NP69 中 MIR-34AHG-133aa 的蛋白表达水平。实-34AHG-133aa 在鼻咽癌细胞中蛋白表达显著下调（鼻咽CNE2、TW03、C666-1；正常鼻咽部细胞：NP69，图 1-2** P＜0.01）。

MIR-34A 前体宿主非编码 RNA 翻译功能性蛋白及对鼻咽癌细胞生物学功能的影响 2019 届硕士学位论文2.3 MIR-34AHG-133aa 表达与鼻咽癌分期及预后的关系通 过 Real time RT-PCR 技 术 对 125 例 鼻 咽 癌 患 者 组 织 样 本 中MIR-34AHG-133aa 的表达进行检测，取表达中位数值 0.102 将患者分为高表达组及低表达组。通过 KM 生存分析不同 MIR-34AHG-133aa 表达水平患者的总体生存率，结果发现高表达 MIR-34AHG-133aa 的鼻咽癌患者总生存率高于低表达者，且差异有统计学意义（*P＜0.05，图 1-3B）。III 期患者的 MIR-34AHG-133aa 表达水平明显高于 IV 期患者（**P＜0.01，图 1-3A）；无局部复发患者中 MIR-34AHG-133aa 表达明显高于出现复发的患者（**P＜0.01，，图 1-3C）；同样，无远处转移的患者 MIR-34AHG-133aa 表达高于转移者（***P＜0.001，图 1-3D）。A B
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R739.63

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本文编号：2613357