银杏叶提取物经Nrf2-ARE信号通路在间歇性低氧胰腺组织中的作用

发布时间：2020-04-08 13:57

【摘要】：目的:观察银杏叶提取物(extract ginkgo biloba,EGB)通过Nrf2-ARE信号通路对慢性间歇性低氧(chronic intermittent hypoxia,CIH)胰腺组织中的影响作用及干预机理。方法:54只野生型雄鼠随机分为9组,分别为正常对照组1、2,间歇性低氧组1、2,和抗体阻断组、Nrf2激活剂组、EGB低、中、高浓度组,每组6只。30只Nrf2基因敲除型雄鼠随机分为5组,分别为正常对照组,间歇性低氧组,EGB低、中、高浓度组,每组6只。所有小鼠适应性饲养一周后开始造模,常氧对照组正常空气中饲养,常氧对照组1组:腹腔注射生理盐水1 ml,每天1次,分别和抗体激活组、抗体阻断组对照。常氧对照组2组:10ml/kg/d生理盐水灌胃,和EGB干预组对照。间歇性低氧组放置低氧仓造模。建模成功后开始干预;间歇性低氧组1组:腹腔注射生理盐水1 ml,每天1次,分别和抗体激活组、抗体阻断组对照。间歇性低氧组2组:10 ml/kg/d生理盐水灌胃,和EGB干预组对照。Nrf2抗体阻断组:腹腔注射抗Nrf2抗体,每天1次;Nrf2激活剂组:腹腔注射莱菔硫烷5mg/Kg·d,Nrf2;EGB低、中、高浓度组:EGB灌胃,剂量分别为50mg/Kg·d、100mg/Kg·d、200mg/Kg·d。干预10周后用RT-PCR半定量和Western-Blot法分别检测胰腺组织核因子E2相关因子2(Nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(Gamma-glutamylcysteine synthetase,γ-GCS)、NAD(P)H:苯醌氧化还原酶1(NAD(P)H-quino oxidoreductase 1,NQO1)的mRNA和蛋白的表达水平。结果:野生型小鼠中,1.蛋白表达情况:与常氧对照组1比较,间歇性低氧组1 HO-1、NQO1表达水平下降,γ-GCS表达升高(p0.05);与间歇性低氧组1比较,Nrf2激活剂组HO-1、NQO1、γ-GCS表达水平均上升(p0.05);抗Nrf2抗体组HO-1、NQO1、γ-GCS表达水平均下降(p0.05);与常氧对照组2比较,间歇性低氧组2 HO-1、NQO1表达水平均下降,γ-GCS表达升高(p0.05);与间歇性低氧组2比较,EGB低浓度组γ-GCS表达水平上升(p0.05);HO-1、NQO1无显著差异(p0.05),EGB中浓度组NQO1、γ-GCS表达水平上升(p0.05);HO-1无显著差异(p0.05),EGB高浓度组HO-1、NQO1、γ-GCS表达水平均上升,且高浓度组比低浓度组变化更明显(p0.05)。2.mRNA表达情况:与常氧对照组1比较,间歇性低氧组1 HO-1、NQO1、γ-GCS mRNA表达下降(p0.05);与间歇性低氧组1比较,抗Nrf2抗体组HO-1、NQO1、γ-GCS mRNA表达均下降(p0.05);Nrf2激活剂组NQO1、γ-GCS、HO-1 mRNA表达升高(p0.05);与常氧对照组2比较,间歇性低氧组1 HO-1、NQO1、γ-GCS mRNA表达下降(p0.05);与间歇性低氧组2比较,EGB低浓度组HO-1 mRNA表达下降,NQO1、γ-GCS mRNA表达升高(p0.05);EGB中浓度组HO-1mRNA表达下降,γ-GCS、NQO1 mRNA表达升高(p0.05);EGB高浓度组HO-1、γ-GCS、NQO1 mRNA表达升高(p0.05)。基因敲除型小鼠中,1.蛋白表达情况:与常氧对照组比较,间歇性低氧组HO-1、NQO1、γ-GCS表达无显著差异(p0.05);与间歇性低氧组比较,EGB低浓度组HO-1、NQO1、γ-GCS无显著差异(p0.05),EGB中浓度组NQO1、γ-GCS表达水平均上升(p0.05);HO-1无显著差异(p0.05),EGB高浓度组通路下游HO-1、NQO1、γ-GCS表达水平均上升,高浓度组比低浓度组变化更明显(p0.05)。2.mRNA表达情况:与常氧对照组比较,间歇性低氧组NQO1、γ-GCS mRNA表达无明显差异(p0.05),HO-1 mRNA表达升高(p0.05);与间歇性低氧组比较,EGB低浓度组NQO1 mRNA表达无明显差异(p0.05),HO-1、γ-GCS mRNA表达升高(p0.05);EGB中浓度组NQO1、HO-1、γ-GCS mRNA表达升高(p0.05);EGB高浓度组NQO1 mRNA表达无明显差异(p0.05),HO-1、γ-GCS mRNA表达升高(p0.05)。结论:1.间歇性低氧导致的氧化应激参与了OSAS的发生发展过程,可能是OSAS胰腺组织损害,胰岛β细胞氧化损伤及凋亡的重要机制。2.Nrf2-ARE信号通路能调节间歇性低氧所致的氧化应激及炎症因子水平,减轻胰腺组织损伤,对胰岛β细胞起保护作用,改善胰岛功能。3.EGB可减轻间歇性低氧后氧化应激损伤程度,对胰腺组织有保护作用,其机制可能与激活Nrf2-ARE信号通路有关。EGB在糖尿病合并OSAS患者的治疗中具有潜在的临床应用价值。
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R766;R587.1

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本文编号：2619430