H3K4me3在中耳胆脂瘤中的表达及临床意义

发布时间：2020-04-10 05:37

【摘要】：第一部分组蛋白H3K4me3在中耳胆脂瘤中的表达目的:量化组蛋白H3赖氨酸4的三甲基化(H3K4me3)在中耳胆脂瘤母组织及外耳道上皮组织中的表达,以研究其在中耳胆脂瘤发生、发展过程中的重要意义。方法:收集2017年9月到2018年6月我院耳鼻咽喉头颈外科收治的中耳胆脂瘤患者30例,以中耳胆脂瘤患者的胆脂瘤母组织为实验组,及同一患者的外耳道上皮组织为对照组,根据免疫印迹实验(Western blot)结果分析H3K4me3的表达水平;得到Western blot结果后,进行免疫组织化学染色实验验证Western blot实验结果,并定位H3K4me3在实验组和对照组中的表达。结果:1.免疫印迹实验结果显示组蛋白H3K4me3在胆脂瘤母组织中的表达水平的明显低于外耳道上皮组织,两者差异有统计学意义。2.免疫组织化学染色结果显示组蛋白H3K4me3在胆脂瘤上皮组织以及外耳道上皮组织中均有表达,定位于胆脂瘤上皮组织以及外耳道上皮组织细胞核中,表现为上皮组织细胞核中棕黄色或棕褐色颗粒;胆脂瘤母组织中组蛋白H3K4me3的表达量明显低于外耳道上皮组织,两者差异有统计学意义。结论:组蛋白H3K4me3在中耳胆脂瘤上皮组织中表达明显下调,可能参与了中耳胆脂瘤发生和发展过程,其有可能成为治疗中耳胆脂瘤的新靶点。第二部分组蛋白H3K4me3甲基化酶及去甲基化酶在中耳胆脂瘤中的表达目的:筛选影响中耳胆脂瘤上皮组织中组蛋白H3K4me3表达异常的主要因子。方法:收集2017年9月到2018年6月我院耳鼻咽喉头颈外科收治的中耳胆脂瘤患者13例,以中耳胆脂瘤患者的胆脂瘤母组织为实验组,及同一患者的外耳道上皮组织为对照组,通过RT-qPCR检测两组标本中JARID1家族(JARID1A,JARID1B,JARID1C,JARID1D),MLL家族(MLL1,MLL2,MLL3,MLL4,SETD1A/B),MLL5以及SET7/9各基因mRNA表达水平,进行相对定量分析,筛选出影响H3K4me3表达差异的可能因子。结果:荧光定量逆转录聚合链反应(RT-qPCR)结果显示组蛋白H3K4me3特异性甲基转移酶MLL家族多种基因在中耳胆脂瘤母组织中表达呈下降趋势,其中包括MLL1、MLL2、MLL5和SETD1A等;其特异性去甲基化酶在中耳胆脂瘤母组织中表达无明显差异。结论:组蛋白H3K4me3在中耳胆脂瘤组织中下调可能是MLL1、MLL2、MLL5和SETD1A等多种特异性甲基转移酶共同作用的结果。
【图文】：

青岛大学硕士学位结果1 Western blot 结果30 例研究对象的 60 例标本经 Western blot 参，60 例样本结果分析中耳胆脂瘤母组织中组为 0.65±0.26，外耳道上皮组织中组蛋白 H3K4m所得统计资料通过方差齐性检验，因此采用配对5.148，P 值为 0.001，，P＜0.05，差异具有统计学组织中组蛋白 H3K4me3 表达水平明显低于外耳

结果阳性为 3 分。免疫组化染色阳性细胞的百分比分级：0 分；<33%为 1 分；33-66%为 2 分；66-100%为 3 分。免疫组化综合评分以染色强度分级和免疫反应阳性细胞百分比之和为依据。H3K4me3 组织表达主要定位于鳞状上皮组织细胞核内，表现为在鳞状上皮细胞核内棕黄色或棕褐色颗粒。（见图 2）所得数据采用卡方检验进行分析，X2=29.433，P=0.001（P＜0.05），差异具有统计学意义（见表 7），表明中耳胆脂瘤母组织中组蛋白 H3K4me3 表达水平明显低于外耳道上皮组织。表 7 H3K4me3 在实验组与对照组在免疫组化评分（强度分级+百分比分级）分组\评分 0 ＜4 分 ≥4 分 总计实验组 0 26 4 30对照组 0 5 25 30总计 0 31 29 60
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R764.21

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本文编号：2621825