Dickkopf-1对人晶状体上皮细胞增生的抑制作用及其机制的实验研究

发布时间：2020-06-02 23:48

【摘要】：目的探讨DKK1通过Wnt/β-catenin信号通路对人晶状体上皮细胞(LECs)增殖的影响及其可能的作用机制,为晶状体后囊膜混浊(PCO)的临床治疗提供新的靶点。方法人LECs系SRA 01/04细胞为研究对象,实验分为3组:Wnt3a过表达组,DKK1组和对照组。Wnt3a过表达组采用脂质体介导转染技术将Wnt3a cDNA表达载体瞬时转染入人LECs系SRA 01/04细胞中,构建PCO的细胞模型。DKK1组在转染Wnt3a cDNA表达载体48 h后加入100 ng/mL DKK1,对照组转染pcDNA3-HA表达载体。采用Western blot技术验证载体在转染细胞中的表达;CCK-8实验检测DKK1对SRA 01/04细胞增殖能力的影响;应用免疫荧光法检测Wnt3a过表达后β-catenin表达的定位变化;采用免疫细胞化学法检测Wnt3a过表达后增生细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的变化;Western blot法检测Wnt3a过表达对Wnt/β-catenin下游信号分子Cyclin D1和C-myc蛋白表达的影响。结果Western blot检测证实,转染pcDNA3-HA表达载体后,SRA 01/04细胞内Wnt3a蛋白表达明显升高。CCK-8实验结果显示,对照组、Wnt3a过表达组及DKK1组细胞的平均吸光度(A)值间的差异有统计学意义(F_(分组)=10.91,P=0.003),不同时间点两组细胞的平均吸光度(A)值差异也具有统计学意义(F_(时间)=6.041,P=0.025)。DKK1组SRA 01/04细胞PCNA蛋白表达阳性率为(14.2%±2.3%),明显低于Wnt3a过表达组的43.4%±5.4%,差异有统计学意义(P0.05)。转染后48 h,β-catenin蛋白密集分布于Wnt3a过表达组细胞核和细胞质中,而在对照组仅出现于细胞质之中,DKK1组β-catenin蛋白主要分布于细胞质中,少量分布于细胞核中。Western blot检测DKK1组Wnt/β-catenin信号通路靶蛋白Cyclin D1和C-myc蛋白表达明显低于Wnt3a过表达组。结论在SRA01/04细胞中,DKK1抑制Wnt3a过表达诱导的Wnt/β-catenin信号通路活化,下游靶蛋白Cyclin D1和C-myc表达下调,抑制人LECs的增生。
【图文】：

1：对照组；2：Wnt3a 过表达组图 1 pcDNA3-HA/SRA01/04 及 Wnt3a/SRA01/04 细胞中 Wnt3a 蛋白的表达2 各组细胞增生值比较 CCK-8 实验结果显示，，对照组、Wnt3a 过表达组及 DK

1：对照组；2：Wnt3a 过表达组；3：DKK1 组图 2 CCK-8 实验检测各组细胞在第 1,2,3,4,5 天的细胞增殖能力表 1 各组细胞不同时间的平均吸光度（A）值（_x±s）不同时间吸光度（A）值
【学位授予单位】：内蒙古医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R77

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本文编号：2693948