PM2.5对鼻粘膜上皮细胞紧密连接蛋白Occludin表达的影响

发布时间：2020-06-03 02:57

【摘要】：目的:探讨不同浓度PM2.5对人正常鼻粘膜上皮细胞紧密连接蛋白Occludin分布及表达的影响。方法:体外培养正常人鼻黏膜上皮细胞系(HNEpC),并用不同浓度PM2.5分别干预细胞24、48小时,采用CCK-8法检测细胞活性,选取200μg/ml、400μg/ml、500μg/ml三个浓度的PM2.5作为实验组干预细胞;采用免疫荧光法、Western-Blot及实时荧光定量PCR分别检测PM2.5干预后细胞紧密连接蛋白Occludin的蛋白分布、表达及相关mRNA水平变化。结果:与对照组相比,24h、48h不同浓度PM2.5干预鼻粘膜上皮细胞后细胞活性均降低(F_(24h)=36.25、F_(48h)=20.26,P0.001),且24h、48h细胞活性与PM2.5浓度呈负相关;免疫荧光法检测发现,对照组细胞为圆形,排列紧密,Occludin呈蜂窝状,分布均匀,连接紧密;200μg/mlPM2.5组较对照组细胞形态稍变长,Occludin分布无明显改变;400μg/mlPM2.5组,细胞数量较前略减少,细胞形态较前更为细长,细胞膜及细胞连接间出现少量空泡;500μg/mlPM2.5组,视野中细胞数量明显减少,形态较前更为细长,呈长梭形,细胞膜出现大量空泡,且Occludin结构断裂;Western-Blot、实时荧光定量PCR检测发现,与对照组相比,除24h-200μg/mlPM2.5组外,其余各组Occludin及相关mRNA相对表达量均下调,24h、48h Occludin表达量呈时间-效应关系。结论:PM2.5可降低正常人鼻黏膜上皮细胞HNEpC活性、同时可以使细胞紧连接Occludin分布、表达及相关mRNA表达降低,这可能是导致过敏性鼻炎的发生的一个机制。
【图文】：

细胞活性,鼻粘膜

1 CCK-8 法检测不同浓度 PM2.5 对细胞活性的影响细胞活性=(OD实验组-OD空白组)/ (OD对照组-OD空白组)*100%，每组细胞设 3 个并计算吸光度平均值。与对照组相比（图 2-1），24h、48h 各组 PM2.5 浓度后对细胞活性的影响较对照组降低，差异具有统计学意义（F24h=36.F48h=20.26，P<0.001）,采用 Spearman 相关分析判断 24h、48h 各浓度 PM预与细胞活性的关系，结果显示二者呈负相关关系（24h：r=-0.883，，P<0.001，r=-0.759，P<0.001），即干预浓度越高、细胞活性越低。根据细胞活性，并相关文献[11]，后续实验选择 200μg/ml、400μg/ml、500μg/ml 三个浓度 PM为实验组。图 2-1 PM2.5 对鼻粘膜细胞活性的影响

鼻粘膜,共聚焦显微镜,免疫荧光染色,刺激细胞

山西医科大学硕士学位论文2 免疫荧光检测 Occludin 蛋白分布不同浓度 PM2.5 刺激细胞 24h 后，特异性抗体进行免疫荧光染色，共聚焦显微镜下观察（图 2-2），对照组细胞为圆形，排列紧密，Occludin 呈蜂窝状，分布均匀，连接紧密；200μg/mlPM2.5 组较对照组细胞形态稍变长，Occludin 分布无明显改变；400μg/ml 组，细胞数量较前略减少，细胞形态较前更为细长，细胞膜及细胞连接间出现少量空泡；500μg/ml 组，视野中细胞数量明显减少，形态较前更为细长，呈长梭形，细胞膜出现大量空泡，且 Occludin 结构断裂。图 2-2 PM 2.5 对鼻粘膜细胞紧密连接 Occludin 形态的影响
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R765

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