ARID1A在鼻咽癌中的表达及其对鼻咽癌细胞恶性生物学行为的影响

发布时间：2020-06-09 14:46

【摘要】：鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是一种高发于中国南部五省及香港、北非和东南亚地区的鼻咽顶部和侧壁的恶性肿瘤,发病率高达0.2%。鼻咽癌的发生发展与EB病毒感染、地域聚集性以及家族易感性有密切关系。尽管近些年来,鼻咽癌的治疗水平得到了进一步提高,但鼻咽癌的整体预后仍然较差,远处转移率高达14.1%。因此,探索鼻咽癌转移复发的分子机制,寻找高效的治疗途径,是提高鼻咽癌患者生存率的关键。AT丰富结合域1A基因(ARID1A,AT-rich interactive-domain 1A)属于染色质重塑复合物SWI/SNF(mating-type switching,SWI/sucrose non fermenting,SNF)家族较早被发现的具有重要意义的成员之一。ARID1A通常被认为是一个潜在的抑癌基因,被证明在子宫内膜相关癌、胰腺癌、乳腺癌和胃癌等肿瘤中频发突变。ARID1A的无意义突变或缺失与PI3K/Akt信号通路具有密切的相关性,ARID1A无意义突变或缺失常常伴随着PI3K/Akt信号通路的激活。到目前为止,ARID1A对鼻咽癌的影响尚未有人报道。目的:本研究主要明确ARID1A在鼻咽癌以及正常鼻咽粘膜中的表达差异,分析ARID1A对鼻咽癌细胞生物学行为的影响以及相关作用机制。方法:1.应用免疫组织化学法检测ARID1A在鼻咽癌组织、正常鼻咽粘膜组织中的表达情况,应用荧光定量PCR以及Western Blot方法检测ARID1A在不同鼻咽癌细胞系及正常鼻咽粘膜细胞中表达情况;2.应用免疫组织化学方法检测ARID1A与鼻咽癌临床病理特征的相关性;3.CCK-8检测ARID1A下调对鼻咽癌CNE1、HNE1细胞增殖的影响;4.流式细胞术检测ARID1A下调对鼻咽癌CNE1、HNE1细胞周期的影响;5.Tanswell侵袭、迁移实验检测ARID1A下调对鼻咽癌CNE1、HNE1细胞侵袭、迁移能力的影响;6.WB检测ARID1A下调对鼻咽癌CNE1、HNE1细胞相关Akt分子通路相关蛋白的表达。结果:1.免疫组化结果显示鼻咽癌组织ARID1A相对表达量显著低于正常鼻咽粘膜组织,差异显著(P0.001);荧光定量PCR及Western Blot结果显示在鼻咽癌细胞系中ARID1A的表达显著低于正常鼻咽粘膜细胞(P0.05);2.免疫组化鼻咽癌组织中ARID1A的表达水平随着临床分期、TNM分期的上升而降低,差异有统计学意义(P0.05);ARID1A与鼻咽癌患者年龄、性别无相关性;3.CCK-8实验结果显示ARID1A下调促进鼻咽癌CNE1、HNE1细胞增殖;4.流式周期实验结果显示ARID1A下调增加鼻咽癌CNE1、HNE1细胞S期的比例;5.Tanswell侵袭、迁移实验结果显示ARID1A下调促进CNE1、HNE1细胞的侵袭、迁移;6.WB结果显示鼻咽癌CNE1、HNE1细胞下调ARID1A后,磷酸化Akt水平明显增高,从而激活了Akt信号通路。结论:1.鼻咽癌组织中ARID1A的表达显著低于正常鼻咽粘膜组织;2.鼻咽粘膜细胞中ARID1A的表达显著低于正常鼻咽粘膜细胞;3.ARID1A的表达与鼻咽癌患者年龄、性别无相关性,与鼻咽癌患者的临床分期、TNM分期以及组织学分型显著相关;4.ARID1A下调促进鼻咽癌CNE1、HNE1细胞增殖;5.ARID1A下调促进CNE1、HNE1细胞的侵袭、迁移;6.鼻咽癌组织及鼻咽癌细胞中下调ARID1A后,磷酸化Akt水平明显增高,与Akt信号通路激活相关。
【图文】：

上皮组织,免疫组化,不知情,临床病理

.1 ARID1A 在鼻咽癌组织及鼻咽癌细胞中表达下调用免疫组化分析正常鼻咽组织和鼻咽癌组织中 ARID1A 的表达情况 HE 切片及免疫组化结果判读的准确性，所有组织标本均由两名病在不知情患者的临床病理结果的情况下，对组织标本进行独立评欠佳或脱片者进行复染，不合格的组织标本予以剔除。对评估有本，两名病理学专家对标本进行重新评估，最终达成一致意见。为 0：阴性；1：弱阳性；2：阳性；和 3：强阳性。染色面积：0:不:1%--10%；2:10%-50%；3:50%--100%；其中最后得分=染色强度 X ，0--3 分定义为低表达，，4--9 分定义为高表达。通过免疫组化分发现在 177 例鼻咽癌组织中，ARID1A 的表达明显下调，P <0.001,统计学意义。（图 1，表一）

鼻咽癌细胞,上皮组织,结果分析,变量

变量 nARID1A 表达(n, %)χ2 高低非癌鼻咽上皮组织 61 45 (73.8) 16 (26.2)14.2880.0鼻咽癌组织17779(44.6) 98 (55.4)采用 Western blotting 和 qRT-PCR（图 2，图 3）分析 ARID1A 在细胞和鼻咽上皮细胞中的表达，通过结果分析，我们发现 ARID1A 在细胞中的表达明显下调， P <0.05 ，具有统计学意表 1：ARID1A 在 66 例非癌性上皮组织和 177 例鼻咽癌组织中的表达Table 1:Expression of ARID1A in 61 non-cancerous epithelial tissues and 177 NPC tissues
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R739.63

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