溶菌酶滴眼液抗干眼症疗效及作用机制研究

发布时间：2020-06-17 12:28

【摘要】：目的:通过摘除泪腺、哈氏腺及第三眼睑建立泪液生成不足型兔干眼模型,评价重组人溶菌酶滴眼液对干眼模型眼表的影响,并探索其作用机制。方法:健康新西兰兔36只,以左眼为手术眼建立干眼模型,右眼不做任何处理。分别在手术前、手术后7d及14d进行Schirmer I试验、泪液蕨样变试验及角膜荧光染色。术后14d随机分为模型组,基础液组,低、中及高浓度溶菌酶滴眼液组,玻璃酸钠组,将模型对照组的右眼设为正常对照组,共7个组,42只兔眼。模型对照组不做任何治疗;基础液组予以基础液(含0.75%NaCl的5 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH6.5)),低、中及高浓度溶菌酶滴眼液组分别依次给予含0.75mg/ml、1.50mg/ml及3.00mg/ml重组人溶菌酶滴眼液(溶菌酶+基础液),玻璃酸钠组予以玻璃酸钠滴眼液(商品名“海露”),各给药组均每日点眼3次、每次2滴,持续点眼28d。分别在给药前、给药后7d、14d、21d及28d进行Schirmer I试验、泪液蕨样变试验及角膜荧光染色。给药28d后光镜观察角膜、结膜病理学改变,免疫组化法检测TGF-β1及TNF-α表达,SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测滴加及未滴加溶菌酶的兔眼房水中溶菌酶含量。结果:1.术后第14d,模型组动物角膜结膜干燥,Schirmer I试验值均5mm/5min(右眼自身对照均10mm);泪液蕨样变试验结晶数量少,间隔大,且形状不规则;荧光素钠染色见角膜点、片状染色。统计学结果表明,与正常组相比,模型组动物泪液分泌量显著降低(P0.01)但泪液结晶评级及角膜荧光素染色评分显著升高(P0.01),表现了泪液“量”和“质”的显著变化,与既往文献报道的干眼症动物模型特征基本类似,表明模型复制成功。2.给药7d,高浓度溶菌酶滴眼液组Schirmer I值最先较模型组显著升高(P0.05);给药14d,中、高浓度溶菌酶滴眼液治疗组,玻璃酸钠组Schirmer I值均较模型对照组、基础液组显著升高(P0.05/0.01);给药28d,低、中及高浓度溶菌酶滴眼液组,玻璃酸钠组泪液分泌量均比模型对照组显著升高(P0.05/0.01)。随着治疗时间的延长,各用药组泪液结晶形态也逐渐呈间隔较小的羊齿状结晶,至给药28d,低、中及高浓度溶菌酶滴眼液组、玻璃酸钠组4个组结晶评级较模型组均明显降低(P0.05),以Ⅰ级和Ⅱ级为主;模型对照组、基础液组虽较0d有所改善,但仍以Ⅲ级和Ⅳ级为主。用药7d,高浓度溶菌酶滴眼液组最先较模型对照组荧光素染色评分降低(P0.05);给药14d,低、中及高浓度溶菌酶滴眼液组、玻璃酸钠组荧光素染色评分均比模型对照组显著降低(P0.05/0.01);给药28d,低、中及高浓度组溶菌酶滴眼液组,玻璃酸钠组荧光素染色评分均比模型对照组和基础液组显著降低(P0.05/0.01)。但以上指标在低、中及高浓度溶菌酶滴眼液组、玻璃酸钠组这4个组间两两比较无明显差异。3.与正常组相比,模型组TNF-α及TGF-β1表达均显著升高(P0.01)。与模型组相比,低、中及高浓度溶菌酶滴眼液组,以及玻璃酸钠4组动物TNF-α的表达显著降低(P0.05)而TGF-β1表达显著升高(P0.05),且较玻璃酸钠组相比,中及高浓度溶菌酶滴眼液组TGF-β1表达显著升高(P0.05),高浓度溶菌酶滴眼液组TNF-α表达显著降低(P0.05)。4、与正常组相比,模型组房水溶菌酶含量均明显降低(P0.01);虽然溶菌酶滴眼液治疗组结果为阳性的数量多于模型组,但差异无统计学意义。结论:1.摘除泪腺、哈氏腺及第三眼睑可以成功建立稳定持续的兔泪液生成不足型干眼模型。2.分泌不足型干眼动物房水中溶菌酶浓度显著降低,补充重组人溶菌酶滴眼液可有效缓解干眼症状,促进眼表损伤修复,且在关键评价指标(泪液分泌量、泪液结晶形态)的恢复速度上明显优于临床已应用的治疗药物玻璃酸钠滴眼液。3.重组人溶菌酶滴眼液在缓解和改善干眼症状的同时,可发挥抑制炎性反应的重要作用,提示其作用机制可能与其对炎性反应的抑制作用相关。4.在人工泪液中添加人工合成的溶菌酶,可显著提升对干眼的治疗效果,本研究为新作用特点的干眼治疗药物研发提供了新的思路。
【学位授予单位】：军事科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R777.34
【图文】：

过程图,泪液,模型建立,过程

图 1.1 兔泪液生成不足型干眼模型建立过程A：全身麻醉后剪除睫毛；B：摘除泪腺；C：摘除第三眼睑；D：摘除哈氏腺；E：暴露球结膜后用 30%三氯乙酸灼烧球结膜；F：从左至右依次为摘除的第三眼睑、哈氏腺、泪腺。1.4 干眼模型的评价指标及方法分别在手术前、手术后 7d 及 14d 进行 Schirmer I 试验、泪液蕨样变试验及角膜荧光染色。所有检查均由同一人在相同的时间段、地点、温度、亮度、湿度环境下进行。1.4.1 Schirmer I 试验在中等湿度和亮度的室内环境下进行。如图 1.2 所示，取一条 5×35mm 滤纸，在首端 5mm 处反折，置于下结膜囊中外 1/3 交界处，5 min 后取出纸条（兔通过眨眼运动有可能挤出滤纸条，注意测量时间内不要让滤纸条离开眼眶），根据刻度读取滤纸湿润部分试纸长度并记录。取连续测量 3 次的平均值为 chirmer I 试验结果。正常情况下滤纸湿润长度大于 10mm/5min。

溶菌酶滴眼液抗干眼症疗效及作用机制研究

SchirmerI试验

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