形觉剥夺性近视眼巩膜组织中HSP47表达变化
发布时间：2020-07-08 04:38
【摘要】：目的:研究豚鼠近视眼巩膜重塑中HSP47(Heat Shock Protein-47)的表达情况,以期明确HSP47在近视发生发展中巩膜塑形中的作用,最终为后续研究通过调节巩膜组织中HSP47水平干预近视发生发展提供理论依据。方法:2周龄健康3色豚鼠(雌雄不限)48只,按照随机数字表法随机将豚鼠分为:对照组(16只)和形觉剥夺性近视眼(FDM)组(32只)。采用蓝色半透明乳胶遮盖右眼的方法制备单眼FDM(Form deprivation myopia)模型,FDM组(近视组和恢复组),其中近视组分别遮盖14天、28天;近视恢复组,分别遮盖10天去除遮盖4天和遮盖24天去除遮盖4天。分别于遮盖前及上述时间点采用带状光检影镜测量各组豚鼠右眼屈光度,于上述时间点处死豚鼠用游标卡尺测量眼轴长度,苏木素 伊红(HE)染色观察后极部巩膜组织中目标物表达规律;并分别采用逆转录聚合酶链式反应(Quantitative realtimePolymerase Chain Reaction,qPCR)和蛋白免疫印迹法(Western Boltting,WB)检测各组豚鼠后极部巩膜组织中HSP47,I型胶原、基质金属蛋白酶-2(Matrix Metalloproteinase 2,MMP2)、抑制因子-1、2(Tissue Inhibitors of Metalloproteinase,TIMP-1、TIMP-2)的mRNA和蛋白相对表达量及分布情况。结果:(1)屈光度及眼轴:2周龄豚鼠造模前各组屈光状态及眼轴均无统计学差异(所有P0.05)右眼屈光度均为远视状态,在分别遮盖2、4周,遮盖10天去除遮盖4天和遮盖24天去除遮盖4天后屈光值变为-1.88±0.52D,-2.46±0.58D,-1.92±0.41D,-2.83±0.72D,眼轴长度为:7.21±0.07mm,7.7±0.21mm,7.32±0.16mm,7.8±0.22mm与对照组比较组间差异均有有统计学意义(所有P0.05)。(2)IHC检测:豚鼠后极部巩膜中HSP47与I型胶原蛋白分子均呈阳性表达。且与相同时间对照组比较,表达呈下降趋势。(3)qPCR检测HSP47,I型胶原、MMP2、TIMP-1、TIMP-2的mRNA表达结果:HSP47 mRNA:4周龄和6周龄对照组,近视组,恢复组分别是0.49±0.19,0.16±0.16,0.10±0.06;1.21±0.56,0.44±0.26,0.26±0.10。FDM组各亚组与相应时间点对照组比较HSP47mRNA表达下降,差异均有统计学意义(所有P0.05)。I型胶原mRNA表达量分别是0.65±0.33,0.31±0.11,0.22±0.13;1.39±0.63,0.43±0.05,0.27±0.14.FDM组各亚组I型胶原mRNA表达量均低于对照组(所有P0.05)。MMP-2 mRNA表达量分别为0.58±0.19,1.21±0.53,1.59±0.82,1.18±0.25,2.33±0.11,5.81±1.82。FDM各亚组与对照组比较MMP-2表达量增加,除四周龄近视组(P=0.77)以外,其余各组差异均有统计学意义(P0.05)。TIMP-1mRNA表达量分别为0.83±0.01,0.65±0.16,0.24±0.13.0.95±0.29,0.23±0.17,0.25±0.17.FDM组各亚组与对照组比TIMP-1mRNA表达下降,(所有P0.01)。TIMP-2mRNA表达量分别为0.68±0.49,0.11±0.03,0.20±0.11,1.61±0.82,0.70±0.30,0.14±0.41.FDM组与相应时点对照组比较TIMP-2 mRNA表达下降,(所有P0.05)。(4)WB检测HSP47,I型胶原、MMP2、TIMP-1、TIMP-2的蛋白表达结果:HSP4蛋白:4周龄和6周龄对照组,近视组,恢复组表达量分别为1.42±0.35,0.66±0.19,0.44±0.20;2.05±0.38,1.11±0.38,0.79±0.53。与相应时间点空白组对照组比较FDM组HSP47蛋白表达下降,差异均有统计学意义(所有P0.05)。I型胶原蛋白表达量分别为1.18±0.28,0.61±0.23,0.35±0.13;1.68±0.40,0.82±0.35,0.50±0.19。与对照组比较FDM组豚鼠I型胶原蛋白表达均下降(所有P0.05)。MMP-2蛋白表达量分别为0.37±0.10,0.67±0.21,1.05±0.40,0.85±0.18,1.51±0.30,1.91±0.24,除四周龄近视组(P=0.82)以外,FDM各亚组与对照组比较表达量增加明显(P0.05)。TIMP1蛋白表达量依次为1.45±0.20,1.05±0.25,0.69±0.16,1.87±0.31,0.42±0.08,0.76±0.25,FDM组各亚组与对照组相比表达量均降低(所有P0.05)。TIMP2蛋白表达量依次为1.14±0.45,0.52±0.20,0.52±0.04,1.96±0.49,1.36±0.49,0.96±0.23,FDM组各亚组与对照相比表达量均降低(所有P0.05)。(5)Pearson线性相关分析显示HSP47和I型胶原在mRNA和蛋白水平均呈相高度正相关。(mRNA:r=0.807,P0.001,蛋白r=0.923,P0.001)结论:1.HSP47在豚鼠巩膜中有表达。2.近视眼巩膜中HSP47与I型胶原表达的下降,且两者之变化趋势高度相似,呈高度正相关。3.近视形成过程中胶原蛋白降解增加不仅与MMPs与TIMPs体系失衡有关,还可能与HSP47减少导致新合成的胶原对蛋白酶敏感,更易被蛋白酶水解有关。
【学位授予单位】：遵义医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R778.11
【图文】：
模型遮盖 14 天组（4 周龄近视组）、形觉剥夺性近视模型遮盖 10 天恢复 4 天组（4周龄恢复组）、形觉剥夺性近视模型遮盖 28 天组（6 周龄近视组）、形觉剥夺性近视模型遮盖 24 天恢复 4 天组（6 周龄恢复组），共 5 组，其中正常组 16 只，分别于 4周龄、6 周龄取材，分析正常豚鼠巩膜中 HSP47 的表达的基础水平。近视眼模型组每组 8 只，取右眼作为实验眼，并与正常对照组匹配年龄。分析 HSP47 等指标在近视发生发展中和诱导性近视恢复中的表达。2.2 诱导形觉剥夺性近视（FDM）模型取右眼为实验眼，用 6 号半透明蓝色乳胶气球套住 FDM 组豚鼠头部，剪去左眼、鼻子唇部、耳部等部位的气球以暴露这些部位，不影响摄食和进水，遮盖眼能自由瞬目，不压迫眼睑（图 1）FDM 近视组右眼遮盖 2、4 周，近视恢复组遮盖10 天、24 天后去遮盖 4 天。正常照组不做任何处理。造模期间定时检查，防止豚鼠头套脱落。
不同组别 HSP47、collagen I、 MMP-2 、 TIMP-1、TIMP-2 的蛋白表达量，注：D1/2 表示：4 周龄对照组 J1/2 表示：4 周龄近视组，H1/2 表示：4 周龄近视恢复组，D 表示：6 周龄对照组，J 表示：6 周龄近视组，H 表示：6 周龄近视恢复组3.2.1 空白对照组与 FDM 组不同时间点 HSP47、I 型胶原蛋白相对表达量比较。FDM 组豚鼠（近视组、恢复组）相对于空白对照组不同时间点 HSP47、I 型胶原蛋白总体差异有统计学意义（HSP47 F分组=16.043，P=0.000; F时间=8.088 P=0.015 ，I 型胶原 F分组=20.830，P=0.000; F时间=4.765 P=0.049 .），与相应时间点空白组对照组比较 FDM 组豚鼠（近视组、恢复组）右眼 HSP47、I 型胶原蛋白表达减少明显，差异统计学意义（P<0.05）。（表 5,6）表 5 空白对照组与 FDM 组不同时间点 HSP47 蛋白相对表达量比较（ x±s）组别 n不同时点 HSP47 蛋白相对表达量4 周龄 6 周龄 P 值对照组 6 1.42±0.35 2.05±0.38近视组 6 0.66±0.19a1.11±0.38a
图 5 各组豚鼠后极部巩膜中 HSP47 的表达及分布(DABx100), A：4 周龄空白对照组豚鼠后极部巩膜中 HSP47 阳性表达，呈棕色（箭头）B: FDM 组遮盖 10 天恢复 4 天组可见豚鼠后极部巩膜中 HSP47 阳性表达，表达强度较空白对照组减弱(箭头) C: FDM 组遮盖 2 周组可见豚鼠后极部巩膜中 HSP47 阳性表达，表达强度较空白对照组减弱(箭头). D：6 周龄空白对照组豚鼠后极部巩膜中 HSP47 阳性表达，呈棕色（箭头）E: FDM 组遮盖 24 天恢复 4天组可见豚鼠后极部巩膜中 HSP47 阳性表达，表达强度较空白对照组减弱(箭头) F: FDM 组遮盖 4 周组可见豚鼠后极部巩膜中 HSP47 阳性表达，表达强度较空白对照组减弱(箭头)。
本文编号：2746105
【学位授予单位】：遵义医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R778.11
【图文】：
模型遮盖 14 天组（4 周龄近视组）、形觉剥夺性近视模型遮盖 10 天恢复 4 天组（4周龄恢复组）、形觉剥夺性近视模型遮盖 28 天组（6 周龄近视组）、形觉剥夺性近视模型遮盖 24 天恢复 4 天组（6 周龄恢复组），共 5 组，其中正常组 16 只，分别于 4周龄、6 周龄取材，分析正常豚鼠巩膜中 HSP47 的表达的基础水平。近视眼模型组每组 8 只，取右眼作为实验眼，并与正常对照组匹配年龄。分析 HSP47 等指标在近视发生发展中和诱导性近视恢复中的表达。2.2 诱导形觉剥夺性近视（FDM）模型取右眼为实验眼，用 6 号半透明蓝色乳胶气球套住 FDM 组豚鼠头部，剪去左眼、鼻子唇部、耳部等部位的气球以暴露这些部位，不影响摄食和进水，遮盖眼能自由瞬目，不压迫眼睑（图 1）FDM 近视组右眼遮盖 2、4 周，近视恢复组遮盖10 天、24 天后去遮盖 4 天。正常照组不做任何处理。造模期间定时检查，防止豚鼠头套脱落。
不同组别 HSP47、collagen I、 MMP-2 、 TIMP-1、TIMP-2 的蛋白表达量，注：D1/2 表示：4 周龄对照组 J1/2 表示：4 周龄近视组，H1/2 表示：4 周龄近视恢复组，D 表示：6 周龄对照组，J 表示：6 周龄近视组，H 表示：6 周龄近视恢复组3.2.1 空白对照组与 FDM 组不同时间点 HSP47、I 型胶原蛋白相对表达量比较。FDM 组豚鼠（近视组、恢复组）相对于空白对照组不同时间点 HSP47、I 型胶原蛋白总体差异有统计学意义（HSP47 F分组=16.043，P=0.000; F时间=8.088 P=0.015 ，I 型胶原 F分组=20.830，P=0.000; F时间=4.765 P=0.049 .），与相应时间点空白组对照组比较 FDM 组豚鼠（近视组、恢复组）右眼 HSP47、I 型胶原蛋白表达减少明显，差异统计学意义（P<0.05）。（表 5,6）表 5 空白对照组与 FDM 组不同时间点 HSP47 蛋白相对表达量比较（ x±s）组别 n不同时点 HSP47 蛋白相对表达量4 周龄 6 周龄 P 值对照组 6 1.42±0.35 2.05±0.38近视组 6 0.66±0.19a1.11±0.38a
图 5 各组豚鼠后极部巩膜中 HSP47 的表达及分布(DABx100), A：4 周龄空白对照组豚鼠后极部巩膜中 HSP47 阳性表达，呈棕色（箭头）B: FDM 组遮盖 10 天恢复 4 天组可见豚鼠后极部巩膜中 HSP47 阳性表达，表达强度较空白对照组减弱(箭头) C: FDM 组遮盖 2 周组可见豚鼠后极部巩膜中 HSP47 阳性表达，表达强度较空白对照组减弱(箭头). D：6 周龄空白对照组豚鼠后极部巩膜中 HSP47 阳性表达，呈棕色（箭头）E: FDM 组遮盖 24 天恢复 4天组可见豚鼠后极部巩膜中 HSP47 阳性表达，表达强度较空白对照组减弱(箭头) F: FDM 组遮盖 4 周组可见豚鼠后极部巩膜中 HSP47 阳性表达，表达强度较空白对照组减弱(箭头)。
【相似文献】
相关期刊论文 前6条
1 傅培，李美玉;人眼巩膜筛板结构的研究[J];中华眼科杂志;1994年05期
2 李建军，张希兰，杨济芳，孙芳娥，刘英奇;足月胎儿巩膜筛板的形态测量学研究[J];眼科研究;1995年02期
3 王 华，刘桂香，袁桂芬，侯颖一，王济中，田德明;人眼巩膜筛板发育的研究[J];中华眼科杂志;1994年05期
4 张颖;姜万玲;张慧芝;孙惠斌;;复方樟柳碱联合维生素B_(12)眼局部注射治疗前部和后部缺血性视神经病变[J];中国药物与临床;2016年03期
5 李建军,张希兰,杨济芳,孙芳娥,刘英奇;人视神经筛板的发育和结构研究──光镜观察[J];眼科研究;1996年01期
6 李荣德;;视神经乳头水肿的发生机制[J];医学文摘(眼科学);1965年01期
相关博士学位论文 前2条
1 容烁;离子导入核黄素—紫外线A快速巩膜交联术治疗近视的实验研究[D];太原理工大学;2017年
2 魏菁;猫眼放射状视神经切开术的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2006年
相关硕士学位论文 前1条
1 田青山;形觉剥夺性近视眼巩膜组织中HSP47表达变化[D];遵义医科大学;2019年
本文编号：2746105
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/wuguanyixuelunwen/2746105.html
最近更新
教材专著
