TSP-1活性片段VR-10合成多肽对大鼠脉络膜新生血管的影响

发布时间：2020-08-11 13:45

【摘要】：实验目的：(1)构建激光诱导BN大鼠脉络膜新生血管动物模型(2)观察TSP-1在大鼠脉络新生血管中的表达(3)探讨TSP-1活性片段VR-10对大鼠脉络膜新生血管的作用。实验方法：(1)BN大鼠脉络膜新生血管模型的建立BN大鼠在裂隙灯显微镜及+90D前置镜下,用半导体激光(波长532nm),围绕视乳头周围进行视网膜光凝,每眼击射8点,第一批10只BN大鼠(20眼),第二批30只BN大鼠(60眼)。(2)玻璃体腔注药第二批30只BN大鼠(60眼),进行视网膜光凝后当天行玻璃体腔注药,左眼为对照组,注入2ul BSS,右眼为实验组,注入2ul VR-10 (1mg/ml),第一批不注药。(3)眼底血管荧光素造影(fundus fluorescein angiography,FFA)结果观察第一批BN大鼠视网膜光凝后分别于第7、14、28天行FFA检查,第二批BN大鼠视网膜光凝后第14天行FFA检查,观察FFA检查结果。(4)HE染色光镜病理改变第一批BN大鼠于光凝后第14、28天,FFA后6小时处死,摘除眼球,进行石蜡切片HE染色,光镜观察形态变化；第二批于光凝后第14天行FFA检查,随机选取10只大鼠(20眼),FFA后6小时处死,摘除眼球,进行冰冻切片HE染色,光镜观察形态变化。(5) Western blotting实验第二批另20只大鼠(40眼)应用Western blotting方法对TSP、VEGF蛋白进行定量分析。实验结果：1.造模成功率为75%。2.第一批FFA检查：视网膜光凝后第7天出现CNV,第14天CNV达高峰,第28天CNV减退；第二批FFA结果：光凝后14天可见高荧光渗漏,实验组渗漏较对照组轻。3.光镜下观察1)正常大鼠视网膜脉络膜各层组织结构清晰、完整。2)第一批BN大鼠激光光凝部位视网膜色素上皮(pigment epithelium of retina,RPE)层、Bruch膜破裂,呈网格样改变,外核层(outer nuclear layer,ONL)、内核层(inner nuclear layer,INL)受损,部分消失,脉络膜见毛细血管层损伤、色素脱失,可见新生血管膜自脉络膜突破视网膜各层向玻璃体腔生长。玻璃体腔可见积血。3)第二批BN大鼠光凝后14天,对照组激光光凝部位,视网膜结构紊乱,脉络膜见新生血管的管腔,Bruch膜破裂,新生血管向视网膜层生长；实验组激光光凝部位,视网膜结构紊乱程度较对照眼轻,脉络膜见新生血管较对照眼程度轻。4.WB检测：第二批另20只BN大鼠(40眼)：以β-Actin作为内参,眼组织中均有VEGF和TSP-1的表达。对照组VEGF表达情况为0.866±0.072,实验组VEGF表达情况为0.719±0.060*,实验组与对照组相比差异有统计学意义(t=41.686,P0.05)；对照组TSP-1表达情况为0.033±0.009,实验组TSP-1表达情况为0.333±0.053*,实验组与对照组相比差异有统计学意义(t=381.971,P0.05)。结论：成功构建激光诱导BN大鼠脉络膜新生血管动物模型：激光诱导后14天达高峰；TSP-1活性片段VR-10对大鼠脉络膜新生血管通过减少VEGF增加TSP-1而起抑制作用。
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R774.1
【图文】：

光凝,网膜,后视,脉络膜新生血管

讨论逡逑本实验采用半导体激光诱导脉络膜新生血管模型，成功模拟脉络膜新化血管逡逑的动态形成过程，造模成功率为７５％，可顺利进行下一步实验，与半导体激光诱逡逑导大鼠脉络膜新生血管模型是目前较成熟的脉络膜模型结论相一致。ＦＦＡ结果逡逑示：激光诱导后１４天达高峰，与杨秀梅等研究结果一致。逡逑一、脉络膜新生血管模型的的成功率与无效率逡逑本实验采用半导体激光诱导脉络膜新生血管模型，造模成功率为７５％，分逡逑析其造模无效率，其原因可能是：（１）聚焦问题。激光光凝视网膜的位置选择逡逑围绕视郭头进行光凝，而ＢＮ大鼠的视乳头，一共有５－８对中央血管从中穿出，逡逑

光凝,网膜,后视,脉络膜新生血管

光凝后１４天，对照组激光光凝部位，视网膜结构奈乱，脉络膜见新生血管的逡逑管腔，Ｂｒｕｃｈ膜破裂，新生血管膜突破视网膜各层向玻璃体腔生长，可见玻璃体逡逑积血。（图２－３－图２－８）逡逑图２－３光凝后第１４天ＨＥＸ邋１０逦图２－４光凝后第１４天ＨＥｘ４０逡逑３４逡逑

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