木犀草素对碘酸钠诱导的视网膜色素上皮细胞及视网膜损伤保护作用的实验研究

发布时间：2020-09-07 10:07

　　 目的探讨木犀草素对碘酸钠诱导的视网膜色素上皮细胞及视网膜损伤的保护作用。方法体外实验选择ARPE-19细胞,先将细胞分为对照组、单纯木犀草素浓度梯度组及对照组、碘酸钠模型组、木犀草素浓度梯度治疗组,MTT分别检测各组细胞活力。随后将细胞分为对照组,碘酸钠模型组,木犀草素治疗组(50μmol·L~(-1)),Hoechst33342染色和流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blotting检测Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3及HMGB1、TLR4、NF-κB相对表达量的变化。体内实验:将30只C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组、碘酸钠模型组和木犀草素治疗组,木犀草素治疗组给予木犀草素预处理1周后,模型组与治疗组鼠尾静脉给予碘酸钠造模,木犀草素治疗组继续如前给药4周,OCT测量测视网膜厚度,HE染色观察形态学变化并统计玻璃膜疣数量,ERG检测a波、b波振幅及其潜伏期。结果体外实验:MTT显示,与对照组相比,单纯木犀草素浓度(10-100)μmol·L~(-1)吸光度值无明显变化(P0.05),而单纯木犀草素浓度为200μmol·L~(-1)时吸光度值低于对照组(P0.05);碘酸钠模型组吸光度值低于对照组(P0.05),木犀草素浓度梯度治疗组吸光度值均高于碘酸钠模型组(P0.05)。Hoechst33342染色显示,碘酸钠模型组细胞凋亡率高于对照组(P0.05),木犀草素治疗组细胞凋亡率低于碘酸钠模型组(P0.05)。流式细胞计数显示,与对照组相比碘酸钠模型组细胞凋亡率更高(P0.05),而木犀草素治疗组细胞凋亡率较碘酸钠模型组低(P0.05)。Western blotting检测显示,碘酸钠模型组Bcl-2相对表达量低于对照组(P0.05),木犀草素治疗组Bcl-2相对表达量高于碘酸钠模型组(P0.05),碘酸钠模型组Bax,cleaved caspase-3以及HMGB1、TLR4、NF-κB相对表达量均高于对照组(P0.05),木犀草素治疗组Bax,cleaved caspase-3以及HMGB1、TLR4、NF-κB相对表达量均低于碘酸钠模型组(P0.05)。体内实验:OCT显示,对照组各层结构排列均一整齐,与碘酸钠模型组相比,木犀草素治疗组RPE层高反射点减少,内核层和外核层相对厚度增加(P0.05),全层视网膜相对厚度增加(P0.05)。HE染色显示,与碘酸钠模型组比,木犀草素治疗组内核层、外核层外核层细胞密度更高(P0.05),RPE层连续性增加,玻璃膜疣数量减少(P0.05),ERG显示,碘酸钠模型组a波、b波振幅及其潜伏期均低于对照组(P0.05),木犀草素治疗组a波、b波振幅及其潜伏期均高于碘酸钠模型组(P0.05)。结论木犀草素通过减轻HMGB1/TLR4/NF-κB介导的炎症抑制碘酸钠诱导的RPE细胞凋亡并减少视网膜损伤。
【学位单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R774.1
【部分图文】：

结果一、 木犀草素对碘酸钠诱导 ARPE-19 细胞活力影响MTT 测定结果显示（图 1A），木犀草素浓度为（10-100）μmol·L-1时与对照组相比吸光度值无明显变化，差异均无统计学意义（P>0.05）；木犀草素浓度为200μmol·L-1时与对照组相比吸光度值明显降低，差异有统计学意义（P<0.05），说明对 ARPE-19 细胞而言，木犀草素安全浓度为（10-100）μmol·L-1。随后为了评估安全浓度范围内木犀草素对碘酸钠诱导 ARPE-19 细胞活力影响，我们发现（图 1B），碘酸钠模型组吸光度值低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），木犀草素浓度梯度治疗组各组吸光度值均高于碘酸钠模型组，差异均具有统计学意义（P<0.05）。木犀草素浓度在 50μmol·L-1时吸光度值最高，后续体外实验均以 50μmol·L-1作为木犀草素治疗组浓度。

结果一、 木犀草素对碘酸钠诱导 ARPE-19 细胞活力影响MTT 测定结果显示（图 1A），木犀草素浓度为（10-100）μmol·L-1时与对照组相比吸光度值无明显变化，差异均无统计学意义（P>0.05）；木犀草素浓度为200μmol·L-1时与对照组相比吸光度值明显降低，差异有统计学意义（P<0.05），说明对 ARPE-19 细胞而言，木犀草素安全浓度为（10-100）μmol·L-1。随后为了评估安全浓度范围内木犀草素对碘酸钠诱导 ARPE-19 细胞活力影响，我们发现（图 1B），碘酸钠模型组吸光度值低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），木犀草素浓度梯度治疗组各组吸光度值均高于碘酸钠模型组，差异均具有统计学意义（P<0.05）。木犀草素浓度在 50μmol·L-1时吸光度值最高，后续体外实验均以 50μmol·L-1作为木犀草素治疗组浓度。

图 2 Hoechst 33342 染色和流式检测结果注：图 2A 和 B：a：对照组；b：碘酸钠模型组；c：木犀草素治疗组。图 2C 和 D：分别为 Hoechst 33342 染色和流式检测的 ARPE-19 细胞凋亡率统计图，与对照组相比，*P＜0.05，与碘酸钠模型组相比，**P＜0.05。三、 木犀草素对碘酸钠诱导 ARPE-19 细胞中 Bcl-2、Bax、

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本文编号：2813199