二亚硝基哌嗪（DNP）诱导AGR2基因表达参与鼻咽癌侵袭转移的分子机制

发布时间：2017-04-02 06:04

  本文关键词：二亚硝基哌嗪（DNP）诱导AGR2基因表达参与鼻咽癌侵袭转移的分子机制，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:本文分析二亚硝基哌嗪(N,N’-Dinitrosopiperazine,DNP)对鼻咽癌细胞侵袭转移和AGR2(Anterior gradient 2)、CTSB(Cathepsin B)和CTSD(Cathepsin D)基因表达的影响,探讨DNP调控AGR2、CTSB和CTSD表达参与鼻咽癌侵袭和转移的分子机制。方法:1.以低转移潜能鼻咽癌细胞6-10B和高转移潜力鼻咽癌细胞5-8F作为实验材料。用DNP(100μM)处理鼻咽癌细胞6-10B,以0.1%DMSO(DNP溶剂)处理细胞作为对照,检测细胞侵袭迁移能力。2.采用细胞划痕实验分析DNP对6-10B细胞迁移能力的影响。3.采用Transwell实验检测DNP处理鼻咽癌细胞6-10B后,细胞的侵袭转移能力。4.采用Real-time PCR技术检测DNP处理鼻咽癌细胞6-10B细胞AGR2、CTSB和CTSD基因的表达。5.采用SPSS13.0分析实验数据。结果:1.划痕实验分析DNP处理鼻咽癌细胞6-10B迁移能力,结果显示DNP处理组细胞迁移至中央划痕区的数量明显多于对照组,细胞迁移能力显著增强。2.Transwell实验分析DNP对鼻咽癌细胞6-10B侵袭转移能力,实验结果显示DNP处理组鼻咽癌6-10B细胞24h内穿过滤过膜细胞数显著多于对照组细胞,6-10B细胞迁移和侵袭能力显著增强。3.Real-time PCR分析DNP处理6-10B细胞AGR2、CTSB和CTSD基因表达,结果显示DNP处理6-10B细胞AGR2、CTSB和CTSD基因相对表达量分别为1.54±0.06(P0.05),0.80±0.07(P0.05)和0.84±0.10(P0.05);高转移鼻咽癌细胞5-8F AGR2、CTSB和CTSD基因相对表达量分别为1.93±0.52(P0.05),1.39±0.25(P0.05)和1.32±0.11(P0.05)。DNP处理组AGR2基因表达显著高于对照组,而DNP处理6-10B细胞对CTSB和CTSD基因表达无明显影响。高转移鼻咽癌细胞5-8F AGR2基因表达显著高于低转移鼻咽癌细胞6-10B。结论:鼻咽癌细胞AGR2基因高表达与鼻咽癌转移能力有关,DNP诱导AGR2基因转录可能是鼻咽癌高转移重要因素之一。DNP处理对CTSB与CTSD基因转录无明显影响。
【关键词】：DNP 鼻咽癌 AGR2 CTSB CTSB
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.63
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 第一章 前言9-13
• 1 鼻咽癌概述9-10
• 2 AGR2概述10-13
• 第二章 技术路线13-14
• 第三章 实验材料14-18
• 3.1 细胞株14
• 3.2 化学致癌物DNP14
• 3.3 实验试剂14-15
• 3.4 实验耗材15
• 3.5 仪器与设备15-16
• 3.6 引物、探针序列16-17
• 3.7 试剂配制17-18
• 第四章 实验方法18-25
• 4.1 细胞培养18-19
• 4.1.1 细胞实验前准备工作18
• 4.1.2 细胞复苏18
• 4.1.3 细胞传代18-19
• 4.1.4 细胞冻存19
• 4.1.5 实验分组19
• 4.2 细胞划痕实验19-20
• 4.2.1 细胞划痕实验原理19
• 4.2.2 细胞划痕实验步骤19-20
• 4.3 Transwell实验20-21
• 4.3.1 Transwell迁移实验20-21
• 4.3.2 Transwell侵袭实验21
• 4.4 实时荧光定量PCR21-24
• 4.4.1 从待检细胞中抽提细胞总RNA21-22
• 4.4.2 RNA浓度和纯度测定22-23
• 4.4.3 逆转录生成c DNA模板23
• 4.4.4 Real-time PCR23-24
• 4.5 统计学处理24-25
• 第五章 实验结果25-30
• 5.1 细胞划痕实验结果25-26
• 5.2 Transwell迁移实验26
• 5.3 Transwell侵袭实验26-27
• 5.4 Real-time PCR结果27-30
• 第六章 讨论30-35
• 6.1 鼻咽癌临床特征30
• 6.2 鼻咽癌转移机制30-32
• 6.3 AGR2、CTSB和CTSD与肿瘤转移32-33
• 6.4 DNP促进鼻咽癌转移的分子机制33-35
• 第七章 结论35-36
• 参考文献36-42
• 缩略词表42-44
• 综述 MICAL家族与肿瘤侵袭转移44-53
• 参考文献49-53
• 在校期间已发表学术论文53-54
• 致谢54

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 ;Treatment outcomes for different subgroups of nasopharyngeal carcinoma patients treated with intensity-modulated radiation therapy[J];癌症;2011年08期

2 Malcolm J. Simons;;The prevalence and prevention of nasopharyngeal carcinoma in China[J];癌症;2011年02期

3 Chikin Kuok;;Identification and expression analysis of mical family genes in zebrafish[J];遗传学报;2010年10期

4 Juliati Rahajeng;Sai Srinivas Panapakkam Giridharan;Naava Naslavsky;Steve Caplan;;Important relationships between Rab and MICAL proteins in endocytic trafficking[J];World Journal of Biological Chemistry;2010年08期

5 韩露;林少俊;潘建基;陈传本;张瑜;张秀春;廖希一;陈奇松;;305例鼻咽癌调强放疗预后因素分析[J];癌症;2010年02期

6 ;Enhancive effect of N,N'-dinitrosopiperazine on inducing precancerous lesion on nasal and/or nasopharyngeal epithelia of TgN(p53mt-LMP1)/HT mice[J];Journal of Zhejiang University(Science B:An International Biomedicine & Biotechnology Journal);2009年03期

  本文关键词：二亚硝基哌嗪（DNP）诱导AGR2基因表达参与鼻咽癌侵袭转移的分子机制，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：281968