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lnc-PCK1-2:1在人晶状体上皮细胞上皮—间质转分化过程中的验证及功能研究

发布时间:2020-10-10 08:54
   目的:研究lnc-PCK1-2:1在人晶状体上皮细胞上皮-间质转分化过程中的表达并初步探讨其分子功能。方法:本课题组前期通过应用10ng/ml的TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞发生上皮-间质转分化,然后应用基因芯片技术筛选出差异表达的lncRNAs,并筛选出上调的前10位lncRNAs。本实验选择其中一种lncRNAs—lnc-PCK1-2:1进行验证和功能研究。利用qRT-PCR验证lnc-PCK1-2:1在人晶状体上皮细胞上皮-间质转分化过程中的表达。应用10ng/ml TGF-β2的DMEM培养基,再转染siRNA-lnc-PCK1-2:1质粒,此为siRNA-lnc-PCK1-2:1+TGF-β2组。加入10ng/ml TGF-β2的DMEM培养基,再转染siRNA-NC质粒,此为siRNA-NC+TGF-β2组。只加入DMEM培养基,再转染siRNA-lnc-PCK1-2:1质粒,此为siRNA-lnc-PCK1-2:1组。只加入DMEM培养基,再转染siRNA-NC质粒,此为siRNA-NC组。应用细胞免疫荧光和Western blot方法观察各组细胞中EMT相关分子平滑肌肌动蛋白(a-SMA)、钙黏附蛋白E(E-Cadherin)在蛋白水平的表达;应用qRT-PCR检测各组细胞中mRNA的表达变化。结果:证实lnc-PCK1-2:1在人晶状体上皮细胞上皮-间质转分化过程中表达。在siRNA-lnc-PCK1-2:1+TGF-β2组、siRNA-NC+TGF-β2组中细胞胞浆中a-SMA荧光强度逐渐增强,蛋白表达逐渐增加;E-Cadherin荧光强度逐渐减弱,蛋白表达逐渐减少;在siRNA-lnc-PCK1-2:1组、siRNA-NC组中细胞胞浆中a-SMA荧光强度逐渐增强,蛋白表达逐渐增加;E-Cadherin荧光强度逐渐减弱,蛋白表达逐渐减少;a-SMA的荧光强度、蛋白表达量siRNA-lnc-PCK1-2:1+TGF-β2组大于siRNA-lnc-PCK1-2:1组,siRNA-NC+TGF-β2组大于siRNA-NC组,siRNA-lnc-PCK1-2:1+TGF-β2组的E-Cadherin荧光强度、蛋白表达量小于siRNA-lnc-PCK1-2:1组,siRNA-NC+TGF-β2组小于siRNA-NC组;lnc-PCK1-2:1的表达量siRNA-lnc-PCK1-2:1+TGF-β2组大于siRNA-NC+TGF-β2组,siRNA-lnc-PCK1-2:1组大于siRNA-NC组,siRNA-lnc-PCK1-2:1+TGF-β2组大于siRNA-lnc-PCK1-2:1组,siRNA-NC+TGF-β2组大于siRNA-NC组。结论:人晶状体上皮细胞发生上皮-间质转分化过程中lnc-PCK1-2:1高表达并且沉默lnc-PCK1-2:1的表达可抑制晶状体上皮细胞发生上皮-间质转分化。
【学位单位】:桂林医学院
【学位级别】:硕士
【学位年份】:2019
【中图分类】:R776.1
【部分图文】:

形态图,倒置显微镜,形态,诱导组分


16图 1 倒置显微镜下细胞的形态(×100)Figure 1 Morphology of cells under inverted microscope (x 100).2 qRT - PCR 检测细胞中 lnc-PCK1-2:1 表达为了证实 HLE B - 3 经 TGF - β2诱导后存在 lnc-PCK1-2:1 表达变化,我 使 用 实 时 荧 光 定 量 PCR 法 来 检 测 对 照 组 和 TGF - β2诱 导 组 中nc-PCK1-2:1 mRNA 含量。结果显示:人晶状体上皮细胞 HLE B - 3 经 TGF β2诱导后,细胞 lnc-PCK1-2:1 的 mRNA 相对表达量在对照组和诱导组分为 (1.41 ± 0.36),(6.41 ± 0.71),TGF - β2诱导组与对照组比,lnc-PCK1-2:1 的表达量显著增高,差异具有统计学意义(**P <0.01)。

实时荧光定量PCR,对照组


图 2 实时荧光定量 PCR 检测 lnc-PCK1-2:1 的表达Figure 2 qRT - PCR of lnc-PCK1-2:1与对照组比较,lnc-PCK1-2:1 的 mRNA 的表达量显著增高,差异具有统)。PCR 检测 SiRNA-lnc-PCK1-2:1 对细胞中 lnc-PCK1-2:1 m验转染后各组细胞 lnc-PCK1-2:1 的表达变化,我们采用R 法 来 检 测 对 照 组 和 TGF - β2诱 导 组 分 别 转 染 后1 的 变 化 。 结 果 显 示 : lnc-PCK1-2:1 在 siRNA-NCCK1-2:1 组的相对表达量分别为(1.02 ± 0.32)、(0.51 ±C+ TGF-β2 组、siRNA-lnc-PCK1-2:1+ TGF-β2 组中的相.52 ± 0.27)、(0.69 ± 0.33)。诱导组与对照组比较,lnc-PC

实时荧光定量PCR,免疫荧光法


图 3 实时荧光定量 PCR 检测各组 lnc-PCK1-2:1 的表达Figure 3 qRT - PCR of lnc-PCK1-2:1量 PCR 检测各组 lnc-PCK1-2:1 的表达。NC=siRNA-NC 组,Si=siA-NC+ TGF-β2,Si+=siRNA-lnc-PCK1-2:1+ TGF-β2 组,NC vs SSi+ vs Si P<0.05,NC+ vs Si+ P<0.001,各组比较均有统计学意胞免疫荧光法检测SiRNA-lnc-PCK1-2:1对细胞EM响免疫荧光法检测正常对照组和 TGF - β2诱导组转 - SMA 和 E - cadherin 的表达变化。结果可得,E膜上,而α - SMA 主要分布在细胞质中,在 TGF in 在 siRNA-lnc-PCK1-2:1+ TGF-β2 组、siRNA-NC弱,同样的在对照组中, E - cadherin 在 siRNA-

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本文编号:2835005

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