慢性鼻-鼻窦炎中TFF3的表达及其与MUC5AC、MUC5B协同作用研究

发布时间：2020-11-08 18:38

【摘要】：慢性鼻-鼻窦炎是一种鼻黏膜慢行炎症性疾病,发生在鼻腔和鼻窦。在急性病例中更为常见,通常表现为多个鼻窦的同时受累。慢性鼻-鼻窦炎是一种严重影响患者生活质量的疾病,病程的持续时间越长会加重患者的呼吸道感染症状,严重者甚至引起颅、眼、肺等器官并发症的发生。慢性鼻-鼻窦炎是耳鼻喉头颈外科中最常见的疾病之一,近年来,慢性鼻-鼻窦炎的发病率呈上升趋势。在上呼吸道中,慢性鼻-鼻窦炎的主要临床表现是反复、持续性鼻塞和长期大量流涕(清涕或脓涕),具有“黏液素高分泌性疾病”的特点。目前,对慢性鼻-鼻窦炎发病机制的研究逐步深入,但慢性鼻-鼻窦炎的发病机制尚仍不十分明确,已有研究表明慢性鼻-鼻窦炎的发生、发展是一个复杂的生物学过程,是多方面因素共同作用的结果,根据浸润细胞的不同可分为不同的小类:例如嗜酸细胞浸润型慢性鼻窦炎等。慢性鼻-鼻窦炎的发病常常合并鼻息肉等常见鼻内症状,这也增加了慢性鼻-鼻窦炎疾病发病的复杂性及多样性。近年来,在慢性鼻-鼻窦炎的基础研究中,三叶因子、黏蛋白在慢性鼻-鼻窦炎发生、发展中的作用逐渐引起学者的关注。三叶因子3(TFF3)、黏蛋白MUC5AC(mucin5AC,MUC5AC)、黏蛋白MUC5B(mucin 5B,MUC5B)在慢性鼻-鼻窦炎(chronic rhinosinusitis)中各亚型:嗜酸粒细胞性慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(eosinophilic chronic rhinosnusitis with nasal polyps,EOS-CRSwNP);非嗜酸粒细胞性慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(non-eosinophilic chronic rhinosnusitis with nasal polyps,Non-EOS-CRSwNP);慢性鼻-鼻窦炎不伴鼻息肉(chronic rhinosnusitis without nasal polyps,CRSsNP)中的表达及其在慢性鼻-鼻窦炎中三者的相互作用关系尚未有相关报道,同时如何参与形成上皮的黏膜屏障尚未见报道。本研究检测了慢性鼻-鼻窦炎各亚型中TFF3、MUC5AC、MUC5B的表达及组织定位情况,验证了TFF3与MUC5AC、MUC5B之间表达的协同作用关系,结果表明各亚型之间表达存在统计学差异,初步探讨慢性鼻-鼻窦炎中TFF3与黏液之间的作用关系及对黏膜屏障的作用。目的:1.明确慢性鼻-鼻窦炎各亚型中TFF3、MUC5AC、MUC5B的表达与分布;2.验证慢性鼻-鼻窦炎中TFF3与MUC5AC、MUC5B的协同作用;3.初步阐明慢性鼻-鼻窦炎中两者对黏膜屏障的影响。方法:选取鼻中隔偏曲(Control)患者10例、慢性鼻-鼻窦炎不伴鼻息肉(CRSsNP)患者10例、嗜酸性慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(EOS-CRSwNP)和非嗜酸性慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(Non-EOS-CRSwNP)患者各10例的石蜡组织切片,利用免疫荧光双染技术检测各组TFF3、MUC5AC、MUC5B的表达及分布情况。选取相同患者的黏膜组织,通过蛋白印迹法(Western blot)检测各组黏膜组织中TFF3、MUC5AC、MUC5B的蛋白表达;利用免疫共沉淀技术(Co-Immunoprecipitation)检测TFF3与MUC5AC、MUC5B的共结合情况,明确其协同作用关系。结果:1.免疫荧光双染法检测TFF3、MUC5AC主要共同表达在慢性鼻-鼻窦炎组织的黏膜上皮和杯状细胞。MUC5B主要表达在慢性鼻-鼻窦炎组织的黏膜下腺体中;2.TFF3在CRSsNP中荧光表达最强;MUC5AC、MUC5B在EOS-CRSwNP中荧光表达最强;3.Western blot验证结果表明EOS-CRSwNP、Non-EOS-CRSwNP、CRSsNP中MUC5AC、MUC5B的表达较对照组中的明显升高,且表达具有统计学意义;4.Western blot验证结果表明CRSsNP中TFF3的表达与Control组比较具有统计学意义,EOS-CRSwNP、Non-EOS-CRSwNP则无明显统计学意义;5.Co-Immunoprecipitation验证结果表明CRSsNP中TFF3可与MUC5AC、MUC5B共沉淀,结合形成蛋白复合物协同作用;6.CRSsNP中TFF3、MUC5AC、MUC5B均上调,且具有统计学差异。结论:1.在慢性鼻-鼻窦炎不伴鼻息肉(CRSsNP)中MUC5AC、MUC5B高分泌与TFF3高表达密切相关;考虑TFF3影响MUC5AC、MUC5B的分泌及表达;2.在慢性鼻-鼻窦炎不伴鼻息肉(CRSsNP)中TFF3分别与MUC5AC、MUC5B共沉淀,两两连接形成蛋白复合物,表明两两间存在协同作用关系;3.在慢性鼻-鼻窦炎不伴鼻息肉(CRSsNP)中TFF3与黏蛋白协同作用,可能对上皮的黏膜屏障产生影响。
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R765.9
【图文】：

.05）（图 2）。::MUC5ACGAPDHU n p a ir e d t te s t d a t aUC5AC/GAPDH0 .20 .30 .40 .5******************

、D 为 EOS-CRSwNP 组）tern blot 经灰度值分析发现，TFF3 蛋白在 Non-E的表达水平与 Control 组无明显差异，即无明显统rol 组相比较 TFF3 蛋白水平升高显著，差异具有统TFF3GAPDH

青岛大学硕士学位论文 9：免疫荧光双染法检测 MUC5AC、TFF3 蛋白的表达（A 为 Control 组、B 为 CRSsNP 组on-EOS-CRSwNP 组、D 为 EOS-CRSwNP 组）五：MUC5B、TFF3 免疫荧光双染在鼻黏膜组织中的表达结果显示：CRSsNP（图 10B）组、Non-EOS-CRSwNP（图 10C）组、EOS-CR（图 10D）组中蛋白表达显著高于 Control 组，其中 CRSsNP 组中荧光强度表达强，那么 MUC5B、TFF3 表达部位可能一致，可见表达于黏膜下腺体。而 Non-ECRSwNP 组、EOS-CRSwNP 组中两者表达部位不同，则两者尚不存在相互作用关（图 10）。
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本文编号：2875177