慢性咽炎的咽部菌群多样性特征分析

发布时间：2020-11-09 18:13

　　 背景:慢性咽炎(chronic pharyngitis)为咽部粘膜、粘膜下及淋巴组织的慢性炎症,其病程长,症状顽固,较难治愈。近些年来,空气污染的加重使慢性咽炎的发病逐年增多,同时感染后乱用抗生素又使慢性咽炎的症状加重,迁延不愈。一般认为慢性咽炎的发生多与致病菌感染相关,近来研究表明咽部菌群失调与慢性咽炎的关系更为密切。所以,合理使用抗生素及微生态调节剂,调节咽部菌群平衡,对于慢性咽炎的预防和治疗具有重要的意义。进行咽部菌群的调节,首先要解析慢性咽炎咽部菌群的变化特征。DGGE和二代测序等新的技术和方法对咽部菌群特征的系统分析奠定了基础。解析慢性咽炎患者咽部菌群特征为慢性咽炎的有效防治打开了新思路。目的:分析患者和正常人的咽部菌群结构,探索慢性咽炎患者咽部菌群分布的多样性变化,找出慢性咽炎患者与正常人咽部差异菌群,为指导临床对该病进行菌群调节及针对性的治疗奠定基础。方法:1.选取15例临床诊断为单纯慢性咽炎患者为研究组,并选取15例正常健康人(非慢性咽炎)作为对照组。2.取两组患者的外周静脉血,测其白细胞总数及其各项血细胞的数量,并比对两组人群间各项指标的差异。3.分别用无菌咽拭子取口咽部分泌物,对取到的咽部分泌物提取DNA并将其进行聚合酶链反应扩增后联合变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)的方法进行菌群多样性的分析。对于DGGE电泳结果进行比对后,将两组有差异性的条带进行切胶测序,测序结果在GenBank数据库中进行Blast对比分析,最终可获得两组部分差异性的菌群种属。4.用链球菌属、不动杆菌属、金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌四种菌属(或菌种)的特定引物做验证性PCR,以鉴定两组人群咽部中是否含有这四种菌及其含量的差异。结果:1.与正常人相比,慢性咽炎患者外周血中白细胞总数和中性粒细胞数量显著增高(p0.05)。2.慢性咽炎患者的咽部菌群种数比正常人显著增多(p0.01)。3.两组人群具有差异性的菌属的测序结果:慢性咽炎患者咽部明显差异的菌属为兼性双球菌属(Gemella)、韦荣球菌属(Veillonella)、普雷沃菌属(Prevotella);正常人明显差异性菌属为奈瑟菌属(Neisseria);两种人群均明显存在的菌属中,慢性咽炎患者相对较少的菌属为假单胞菌属(Pseudomonas),而慢性咽炎患者相对较多的菌属为链球菌属(Streptococcus)。4.PCR结果表明,慢性咽炎患者与正常人咽部链球菌属检出率均为100%,且慢性咽炎患者咽部链球菌属含量高于正常人(p0.05);不动杆菌、金黄色葡萄球菌在患者咽部的检出率略高于正常人;表皮葡萄球菌在两组人群咽部均未检出。结论:1.慢性咽炎患者的咽部粘膜环境存在有炎症反应。2.慢性咽炎患者咽部菌群多样性比正常人增高,并出现菌群失调。3.慢性咽炎咽部的菌群失调主要以兼性双球菌属、韦荣球菌属、普雷沃菌属、链球菌属、金黄色葡萄球菌、不动杆菌属的增多和奈瑟菌属、假单胞菌属的减少为主要特征。
【学位单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2015
【中图分类】：R766.14
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
前言
材料与方法
    1. 材料
        1.1 临床资料
        1.2 样本类型
        1.3 试剂
        1.4 仪器
        1.5 分析软件
    2. 方法
        2.1 标本采集
        2.2 样本中总DNA的提取
        2.3 PCR扩增
        2.4 DGGE分析
        2.5 切胶测序
        2.6 测序后特异性菌属的验证
结果
    1 慢性咽炎患者与健康人外周静脉血的白细胞及其种类数量和差别
    2 慢性咽炎患者与健康人的咽部菌群差异性分析
        2.1 DGGE图谱分析
        2.2 聚类分析
        2.3 主成分（PCA）分析
        2.4 差异性菌群分析（测序分析）
    3 特异性菌属的鉴定
        3.1 链球菌属的PCR鉴定
        3.2 不动杆菌属的PCR鉴定
        3.3 表皮葡萄球菌PCR鉴定
        3.4 金黄色葡萄球菌的PCR鉴定
讨论
结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢

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本文编号：2876799