DHA激活NADPH氧化酶/ROS/Nrf2通路诱导ARPE-19细胞表达HO-1

发布时间：2020-12-09 22:29

　　目的:观察二十二碳六烯酸（Docosahexaenoic acid,DHA）诱导人视网膜色素上皮细胞表达血红素氧合酶（Heme oxygenase,HO）-1的分子机制。方法:培养人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19,加入30¹00μmol/L DHA作用4²4 h。Western blot检测HO-1的表达及NADPH氧化酶p47^phox亚基的磷酸化;荧光探针H2DCFDA检测活性氧（Reactive oxygen species,ROS）的产生;免疫荧光分析Nrf2在细胞核及胞浆中的表达;最后采用NADPH氧化酶抑制剂DPI,ROS抑制剂NAC或采用siRNA干扰Nrf2表达,检测其对HO-1表达的影响。结果:100μmol/L DHA作用ARPE-19细胞30 min即可诱导p47^phox亚基的磷酸化,同时能增加细胞内ROS的含量;采用NADPH氧化酶抑制剂DPI处理后,ROS水平显著降低;免疫荧光实验显示DHA作用细胞2 h后,可诱导Nrf2核转位,采用DPI或NAC处理后,Nrf2核转位水... 

【文章来源】：中国免疫学杂志. 2016年05期 第644-647页 北大核心

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

DHA诱导AＲPE-19细胞p47phox亚基磷酸化

图2DHA与DPI对AＲPE-19细胞产生ＲOS的影响Fig．2EffectofDHAandDPIonproductionofＲOSinAＲPE-19cellsNote:*.P＜0.05，ascomparedwithcontrol(0μmol/LDHA);#.P＜0.05，ascomparedwith0μmol/LDHA.图3DPI、NAC对DHA诱导Nrf2核转位的影响Fig．3EffectofDPI，NACandDHAonnucleartransloca-tionofNrf22.2DHA经NADPH氧化酶诱导ＲOS产生30～100μmol/LDHA处理AＲPE-19细胞4h后，可有效增加细胞内ＲOS的含量。而细胞在DHA处理前给予10μmol/LDPI预处理1h，结果显示ＲOS含量明显降低(图2)。2.3DHA经ＲOS激活Nrf2AＲPE-19细胞在DHA处理前，Nrf2位于细胞浆中。经100μmol/LDHA处理4h后，细胞核中Nrf2显著增多。而AＲPE-19首先用10μmol/LDPI或10mmol/LNAC预处理1h后，可显著抑制DHA诱导Nrf2核转位(图3)。2.4DHA上调AＲPE-19细胞中HO-1蛋白表达未刺激时，AＲPE-19细胞内HO-1蛋白表达水平很低。采用30、50和100μmol/LDHA刺激18h后，图4DHA上调AＲPE-19细胞表达HO-1蛋白Fig．4DHAinducesHO-1expressioninAＲPE-19cells图5DPI、NAC或Nrf2siＲNA对DHA诱导HO-1表达的影响Fig．5EffectofDPI，NACandNrf2siＲNAonDHA-in-ducedHO-1expressionNote:A.DPIandNAConDHAinducedHO-1expression;B.EffectofNrf2siＲNAonDHA-inducedHO-1expression.HO-1蛋白表达水平随着DHA浓度的增高而递增(图4)。2.5DHA诱导HO-1产生与NADPH氧化酶/ＲOS/Nrf2有关AＲPE-19细胞在DHA处理前，HO-1表达量极低。经100μmol/LDHA处理18h后，细胞中HO-1表达显著增多。而AＲPE-19首先用10μmol/LDPI或10mmol/LNAC预处理1h后，可显著抑制DHA诱导HO-1表达。此外，采用siＲNA干扰Nrf2表达后，HO-1表达水平也显著减少(图5)。3讨论AMD是与衰老密切相关的一种疾病?

图2DHA与DPI对AＲPE-19细胞产生ＲOS的影响Fig．2EffectofDHAandDPIonproductionofＲOSinAＲPE-19cellsNote:*.P＜0.05，ascomparedwithcontrol(0μmol/LDHA);#.P＜0.05，ascomparedwith0μmol/LDHA.图3DPI、NAC对DHA诱导Nrf2核转位的影响Fig．3EffectofDPI，NACandDHAonnucleartransloca-tionofNrf22.2DHA经NADPH氧化酶诱导ＲOS产生30～100μmol/LDHA处理AＲPE-19细胞4h后，可有效增加细胞内ＲOS的含量。而细胞在DHA处理前给予10μmol/LDPI预处理1h，结果显示ＲOS含量明显降低(图2)。2.3DHA经ＲOS激活Nrf2AＲPE-19细胞在DHA处理前，Nrf2位于细胞浆中。经100μmol/LDHA处理4h后，细胞核中Nrf2显著增多。而AＲPE-19首先用10μmol/LDPI或10mmol/LNAC预处理1h后，可显著抑制DHA诱导Nrf2核转位(图3)。2.4DHA上调AＲPE-19细胞中HO-1蛋白表达未刺激时，AＲPE-19细胞内HO-1蛋白表达水平很低。采用30、50和100μmol/LDHA刺激18h后，图4DHA上调AＲPE-19细胞表达HO-1蛋白Fig．4DHAinducesHO-1expressioninAＲPE-19cells图5DPI、NAC或Nrf2siＲNA对DHA诱导HO-1表达的影响Fig．5EffectofDPI，NACandNrf2siＲNAonDHA-in-ducedHO-1expressionNote:A.DPIandNAConDHAinducedHO-1expression;B.EffectofNrf2siＲNAonDHA-inducedHO-1expression.HO-1蛋白表达水平随着DHA浓度的增高而递增(图4)。2.5DHA诱导HO-1产生与NADPH氧化酶/ＲOS/Nrf2有关AＲPE-19细胞在DHA处理前，HO-1表达量极低。经100μmol/LDHA处理18h后，细胞中HO-1表达显著增多。而AＲPE-19首先用10μmol/LDPI或10mmol/LNAC预处理1h后，可显著抑制DHA诱导HO-1表达。此外，采用siＲNA干扰Nrf2表达后，HO-1表达水平也显著减少(图5)。3讨论AMD是与衰老密切相关的一种疾病?


本文编号：2907580