靶向调控Snail/VDR信号途径逆转喉鳞状细胞癌EMT的实验研究
发布时间：2020-12-19 16:51
目的:近年来,国内外学者应用“上皮间质转化（epithelia-mesenchymal transition,EMT）”学说阐明肿瘤的转移机制,认为肿瘤细胞在不同信号途径调控下发生EMT表型转化进而诱导肿瘤发生局部侵袭和远处转移。而在这一过程中,作为转录因子的Snail起到了关键性作用,Snail通过抑制E-cadherin来诱导EMT已经被广大实验所证实,但Snail家族所特有的通过对VDR基因的调控来启动EMT这一非经典通路的研究尚不够深入,在喉癌中研究更是鲜有报道。本研究探讨Snail/VDR信号通路参与喉鳞状细胞癌EMT的分子机制,并探讨其对喉癌侵袭转移能力的影响。方法:第一部分:通过Western blot及实时荧光定量PCR检测14例喉鳞状细胞癌样本癌（T）与癌旁组织（N）中Snail基因的表达情况。构建shRNA Snail干扰片段Snail sh-RNA-1.sh-RNA-2.sh-RNA-3三种,分别转染至喉癌Hep-2细胞中,选择沉默Snail基因效果最佳者,进行后续实验研究。通过Western blot和RT-PCT检测pRNA-H1.1-Snail小分子干扰片段...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：95 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
1.1Snail在14例喉癌组织细胞中表达明显高于癌旁组织（**p<0.01.）
Snail 在 14 例喉癌组织细胞中表达明显高于癌旁组织（ *p < 0.2 Snail was highly expressed in larynx tissues of patients with lar cell carcinoma (LSCC). The content of Snail in LSCC tissues anding adjacent normal laryngeal tissues was evaluated by real-time P normal tissue.Data are shown as mean±SD. *p < 0.05, **p < 0.01.过 western blot 和 RT-PCR 检测喉癌组织及癌旁组织中 Snail 蛋 Snail 基因 mRNA的表达情况，证实 Snail 在喉癌组组中表达上调 pRNA-H1.1-Snail 载体，对目的基因靶向沉默。建 shRNA Snail干扰片段的方法，我们构建了 Snail sh-RNA-1.sh-3,三种 sh-RNA的具体载体、酶切位点、靶点及测序结果如表 4. 1.3.2.1 构建了 Snail sh-RNA-1.sh-RNA-2. sh-RNA-3 具体内容体 酶切位点靶点（target）靶点正向 反靶向点NA1.1BamHI/HindIIGCTCTTTCCTCGTCAGGATCCCCGCTGCCAACAAGCAGACTATTAGCTAAAATTTCCTCG
部分 Snail/VDR 信号途径参与喉鳞状细胞癌 EMT 分子机ail sh-RNA的干扰功能进行鉴定。将Snail shh-RNA-nc转染至喉癌Hep-2细胞中，以未转 blot检测Snail蛋白的表达情况，推断Snail基基因最强的重组Snail sh-RNA。结果证实Sn佳，具有最为显著的基因沉默效应，可使目实验需求，因此Snail sh-RNA-3被用作后续.1-Snail载体.
【参考文献】：
期刊论文
[1]Hedgehog信号通路在卵巢癌中作用研究进展[J]. 师海英,黄明莉,张广美,张苑珑,尤琪. 中华实用诊断与治疗杂志. 2016(07)
[2]上皮间质转化在肾脏纤维化中的分子机制研究进展[J]. 刘珊,王惠明,丁国华. 临床内科杂志. 2016 (06)
[3]头颈部肿瘤中乏氧与上皮间质转型关系的研究进展[J]. 姜健,梁新华. 中华口腔医学杂志. 2011 (04)
[4]ZEB家族调节上皮-间质转化的作用机制[J]. 沈灵,辛天池,李明发. 细胞生物学杂志. 2009(06)
[5]1,25-二羟基维生素D3对喉癌细胞增殖的抑制作用及其可能机制[J]. 卢连军,查定军,薛涛,邱建华. 癌症. 2009(07)
[6]1,25二羟维生素D3对人喉鳞状细胞癌细胞系增殖及凋亡的影响[J]. 蔡萍,吴展元,李金荣. 临床耳鼻咽喉科杂志. 2006(12)
博士论文
[1]ATG4A对胃癌细胞干性及上皮间质转化的影响及机制研究[D]. 杨世伟.第三军医大学 2016
本文编号：2926250
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：95 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
1.1Snail在14例喉癌组织细胞中表达明显高于癌旁组织（**p<0.01.）
Snail 在 14 例喉癌组织细胞中表达明显高于癌旁组织（ *p < 0.2 Snail was highly expressed in larynx tissues of patients with lar cell carcinoma (LSCC). The content of Snail in LSCC tissues anding adjacent normal laryngeal tissues was evaluated by real-time P normal tissue.Data are shown as mean±SD. *p < 0.05, **p < 0.01.过 western blot 和 RT-PCR 检测喉癌组织及癌旁组织中 Snail 蛋 Snail 基因 mRNA的表达情况，证实 Snail 在喉癌组组中表达上调 pRNA-H1.1-Snail 载体，对目的基因靶向沉默。建 shRNA Snail干扰片段的方法，我们构建了 Snail sh-RNA-1.sh-3,三种 sh-RNA的具体载体、酶切位点、靶点及测序结果如表 4. 1.3.2.1 构建了 Snail sh-RNA-1.sh-RNA-2. sh-RNA-3 具体内容体 酶切位点靶点（target）靶点正向 反靶向点NA1.1BamHI/HindIIGCTCTTTCCTCGTCAGGATCCCCGCTGCCAACAAGCAGACTATTAGCTAAAATTTCCTCG
部分 Snail/VDR 信号途径参与喉鳞状细胞癌 EMT 分子机ail sh-RNA的干扰功能进行鉴定。将Snail shh-RNA-nc转染至喉癌Hep-2细胞中，以未转 blot检测Snail蛋白的表达情况，推断Snail基基因最强的重组Snail sh-RNA。结果证实Sn佳，具有最为显著的基因沉默效应，可使目实验需求，因此Snail sh-RNA-3被用作后续.1-Snail载体.
【参考文献】：
期刊论文
[1]Hedgehog信号通路在卵巢癌中作用研究进展[J]. 师海英,黄明莉,张广美,张苑珑,尤琪. 中华实用诊断与治疗杂志. 2016(07)
[2]上皮间质转化在肾脏纤维化中的分子机制研究进展[J]. 刘珊,王惠明,丁国华. 临床内科杂志. 2016 (06)
[3]头颈部肿瘤中乏氧与上皮间质转型关系的研究进展[J]. 姜健,梁新华. 中华口腔医学杂志. 2011 (04)
[4]ZEB家族调节上皮-间质转化的作用机制[J]. 沈灵,辛天池,李明发. 细胞生物学杂志. 2009(06)
[5]1,25-二羟基维生素D3对喉癌细胞增殖的抑制作用及其可能机制[J]. 卢连军,查定军,薛涛,邱建华. 癌症. 2009(07)
[6]1,25二羟维生素D3对人喉鳞状细胞癌细胞系增殖及凋亡的影响[J]. 蔡萍,吴展元,李金荣. 临床耳鼻咽喉科杂志. 2006(12)
博士论文
[1]ATG4A对胃癌细胞干性及上皮间质转化的影响及机制研究[D]. 杨世伟.第三军医大学 2016
本文编号：2926250
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/wuguanyixuelunwen/2926250.html
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