MiR-155通过TP53INP1调节变应性鼻炎中ILC2表达TH2细胞因子

发布时间：2021-01-16 09:11

　　背景及目的:变应性鼻炎（Allergic Rhinitis,AR）是一种常见的,由过敏原暴露引发的鼻粘膜变态反应性疾病,其主要特点为血清特异性IgE上升及鼻粘膜中增加的Ⅱ型细胞因子。近来研究表明,二型固有淋巴细胞（Group 2 Innate Lymphoid cells,ILC2）在AR发病机制中发挥了作用。ILC2是一种新发现的固有免疫细胞,其具有与TH2细胞相似的效应功能。ILC2本身不表达任何抗原特异性受体。当过敏原暴露后,ILC2响应上皮细胞来源的IL-33、IL-25激活并释放IL-4、IL-5、IL-13等细胞因子是其调节免疫反应的主要途径。然而,目前ILC2在AR中的研究仍处于起步阶段。ILC2响应何种机制调节其细胞因子分泌参与AR的发生和发展,对此仍然没有被很好的理解。MiR-155是一种与免疫功能关系密切的功能性非编码RNA。MiR-155被证实通过调节多种免疫细胞功能参与AR等过敏性疾病的发生发展。在我们课题组及其它研究团对的体内实验中,miR-155参与调节AR等过敏性气道炎症模型中ILC2数量和功能。然而,miR-155在体外是否参与调节ILC2功能以及通过何... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

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【学位级别】：硕士

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免疫荧光和流式细胞术检测免疫磁珠分选后ILC2纯度

第4章结果22图2：MiR-155调节AR患者外周血ILC2功能。RT-qPCR检测miR-155mimics（A）和miR-155inhibitor转染后，ILC2内miR-155表达，以u6为内参。RT-qPCR检测IL-33、IL-25刺激72h后，ILC2中IL-4（C）、IL-5（D）、IL-13（E）mRNA表达水平，以β-Actin基因为内参。ELISA检测ILC2培养上清中IL-4（F）、IL-5（G）、IL-13（H）蛋白分泌量（pg/ml）。*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001。4.2生物信息学分析MiR-155可能的靶基因通过miR-155靶基因预测，我们从miRDB，miRTarBase，和TargetScan三个数据库分别获得297个，888个，7145个靶基因，三者交集包含110个较为可信的靶基因（图3A）。通过对GEO数据库中的芯片数据（GEOaccession：GSE124926）进行差异分析，我们发现，与未激活的ILC2相比，活化的ILC2中有933个差

第4章结果24个（69.7%），下调的基因283个（30.3%）（图3B）。热图显示差异最为明显的前30个（Top30）基因（图3C）。如图3D所示，通过结合miR-155的预测靶基因与ILC2差异表达基因，我们得到10个可能参与ILC2功能的靶基因，其中9个基因（FOS、CREBRF、HBP1、IRF2BP2、DHX40、KBTBD2、TP53INP1、TLE4、GABARAPL1）在活化的ILC2中显著下调（图3E），提示这些基因可能参与miR-155对ILC2的调节功能。为了进一步验证上述结果，我们将miR-155mimics转入ILC2，在IL-33、IL-25、IL-2、PMA/I刺激48h后，通过RT-qPCR检测候选靶基因的表达。结果显示，与对照组相比，过表达miR-155可以抑制ILC2中HBP1（P=0.058）、CREBRF、TLE4、TP53INP1、KBTDB2基因表达，其中miR-155对TP53INP1的抑制作用最为明显。这些结果表明，上述基因很可能作为miR-155下游靶点参与miR-155对ILC2功能的调节过程。图4：RT-qPCR检测miR-155过表达后，候选靶基因mRNA表达水平的改变。以β-Actin基因为内参，将对照组均化为1。*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001。


本文编号：2980546