Nerolidol通过抑制LOX-1/IL-1β信号通路参与角膜抗真菌感染

发布时间：2021-01-21 10:09

　　目的:本实验研究Nerolidol对小鼠烟曲霉菌（Aspergillus fumigatus,AF）性角膜炎的保护性作用,探索其用于治疗的可行性及分子机制。方法:1.通过MIC实验及细胞毒性实验测定Nerolidol对烟曲霉菌的抑菌浓度范围及对细胞的毒性作用,从而选取最佳药物浓度。2.C57BL/6小鼠随机分为四组,分别为对照组、真菌性角膜炎组、药物组以及药物处理后真菌性角膜炎组。采用基质内注射烟曲霉菌孢子的方法建立小鼠真菌性角膜炎模型。药物组以及药物处理后真菌性角膜炎组在感染后2小时、1天、3天、5天球结膜下注射Nerolidol（200μM/5ul）。对照组以及真菌性角膜炎组球结膜下注射等体积PBS。每天使用裂隙灯显微镜对小鼠角膜的感染情况进行观察并拍照记录。3.采用免疫荧光法对真菌感染的小鼠角膜基质内中性粒细胞和巨噬细胞的募集情况进行特异性标记。通过MPO法测定真菌感染的小鼠角膜基质中髓过氧化物酶的活性。4.采用RT-PCR和Western Bolt法检测各组小鼠角膜中模式识别受体LOX-1和促炎因子IL-1β的mRNA及蛋白表达。5.用烟曲霉菌分生孢子刺激HCECs建立真菌感染... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：44 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

（A-B）烟曲霉菌菌丝及分生孢子形态

青岛大学硕士学位论文12图2.（A-C）Nerolidol具有抑制烟曲霉菌生长的作用，但是浓度达到一定高度时影响HCECs的细胞活力。（A）为不同浓度Nerolidol与烟曲霉菌孢子悬浮液共培养24小时后，在460nm处测量光密度值的结果。（B）为不同浓度Nerolidol与烟曲霉菌孢子悬浮液共培养24小时，对烟曲霉菌菌丝细胞壁行特异性染色的结果。（C）为不同浓度Nerolidol对HCECs的细胞毒性。2.3Nerolidol对小鼠烟曲霉菌性角膜炎炎症反应的影响烟曲霉菌感染小鼠角膜后，采用球结膜下注射Nerolidol或PBS的方式对小鼠角膜进行局部干预。感染后第3天和第5天，使用裂隙灯显微镜对小鼠角膜进行观察拍照并由同一实验者记录临床评分。照片显示（图3.AC），与PBS处理组相比，Nerolidol处理组小鼠角膜炎性浸润范围较小，水肿程度较轻，角膜透明度较高。两组间的临床评分有显著的统计学差异（图3.BD）。

结果13图3.（A-D）Nerolidol对小鼠真菌性角膜炎时角膜的炎症程度和临床评分的影响。（AC）分别为烟曲霉菌感染小鼠角膜第3天和第5天，裂隙灯显微镜下观察两组小鼠角膜的炎症情况。（BD）分别为烟曲霉菌感染小鼠角膜第3天和第5天，由同一观察者记录的两组小鼠角膜炎症临床评分的结果。2.4Nerolidol抑制小鼠烟曲霉菌性角膜炎时角膜基质内中性粒细胞和巨噬细胞的募集烟曲霉菌感染小鼠角膜第3天，对小鼠角膜组织行免疫荧光及MPO测定，以检测小鼠角膜基质内中性粒细胞和巨噬细胞的募集情况。免疫荧光结果如图（图4.AC），结果表明，与PBS处理组相比，Nerolidol处理组小鼠角膜基质内中性粒细胞及巨噬细胞浸润减少，差异具有统计学意义。MPO是中性粒细胞所特有，其活性检测是对小鼠角膜中中性粒细胞的定量分析。结果如图所示（图4.B），与PBS处理组相比，Nerolidol处理组小鼠角膜中MPO活性显著降低。

【参考文献】：
期刊论文
[1]Review of clinical and basic approaches of fungal keratitis[J]. Jie Wu,Wen-Song Zhang,Jing Zhao,Hong-Yan Zhou.  International Journal of Ophthalmology. 2016(11)
[2]大鼠烟曲霉菌性角膜炎角膜局部的免疫学研究[J]. 崔红平,苏晶,高新蕊.  眼外伤职业眼病杂志(附眼科手术). 2007(08)



本文编号：2990963