EB病毒编码潜伏膜蛋白LMP2A通过EGFR/Ca 2+ /Calpain/ITGβ4路径促进鼻咽癌细胞转移
发布时间：2021-03-09 02:55
鼻咽癌（Nasopharyngeal Carcinoma,NPC）是发生于鼻咽部黏膜的恶性肿瘤。普遍认为,鼻咽癌的发生发展是基因-环境-EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）感染交互作用的多病因、多步骤过程。在鼻咽癌高发区几乎100%的鼻咽癌患者肿瘤组织为EBV阳性。EBV编码基因在患者所有NPC细胞中持续表达,主要为II型潜伏状态,表达三种潜伏膜蛋白（LMP1、LMP2A、LMP2B）、EBV核抗原1（EBNA1）和EBV编码的小RNAs（EBERs）。这些病毒产物使肿瘤具有更恶性的生物学行为。在转录水平,鼻咽癌中LMP2A的检出率高达90%。我们前期研究发现,表达LMP2A的鼻咽癌细胞迁移和侵袭的能力增强,并与细胞整合素ITGβ4的定位聚集化改变相关。而ITGβ4定位的改变可能导致其参与形成的半桥粒结构瓦解,从而有利于细胞的迁移。本研究探索并证实LMP2A表达诱导的ITGβ4定位改变的分子机制,以期从新的角度阐明LMP2A促进鼻咽癌细胞转移的分子机理。首先,我们成功构建了稳定表达LMP2A的鼻咽癌细胞系CNE1和TW03。将荧光标记的钙离子指示剂用于检测细胞内钙离...
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：115 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
LMP2A的结构与功能
RT-PCR 检测各稳转鼻咽癌细胞系 LMP2A 的转录水平（管家基因 GAPDH 作为内对照）ure1-1 Transcriptional level of LMP2A after transfection.he GAPDH expression was used as an internal control.)钙离子含量增加 表达与钙离子的关系，我们利用钙离子子，使用荧光显微镜观察钙离子在 LE1、TW03 内的分布，发现 LMP2A-CNE1（图 1-2 A）。此外，我们通过荧光酶标仪B），并进行统计学分析，发现钙离子在 L度更高。结果提示，LMP2A 表达增加钙
图 1-2 钙离子荧光指示剂标记细胞内钙离子并检测其含量荧光显微图像显示钙离子探针标记钙离子的亚细胞分布（×40 倍）。B.荧光酶标仪检测钙离，条形图统计分析。（均值±标准差，重复三次）Figure1-2 Fluorescence labeled calciumshowing the subcellular distribution of calciumFluorescence microscopic images showing the subcellular distribution of Fluo-3 labeled calciuP2A negative and positive NPC cell lines Magnification×40. B. The bar graph shows statistical anFluo-3 intensities recorded by fluorescence microplate reader (mean±s.d,n = 3).3 钙离子螯合剂（BAPTA-AM）可减少胞内游离钙离子含量。已知 EGF 刺激可促进钙离子内流，而 BAPTA-AM 抑制钙离子内流后期进一步探讨钙离子在细胞迁移过程中的作用，我们首先分析 EGF BAPTA-AM 与细胞内游离钙离子含量的关系。分别利用 BAPTA-AM（分别为 1μm/L、10μm/L），EGF（浓度分别为 100ng/ml、200ng/ml）处MP2A-CNE1 和 LMP2A-TW03 24 小时后，通过荧光酶标仪读取细胞内
本文编号：3072123
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：115 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
LMP2A的结构与功能
RT-PCR 检测各稳转鼻咽癌细胞系 LMP2A 的转录水平（管家基因 GAPDH 作为内对照）ure1-1 Transcriptional level of LMP2A after transfection.he GAPDH expression was used as an internal control.)钙离子含量增加 表达与钙离子的关系，我们利用钙离子子，使用荧光显微镜观察钙离子在 LE1、TW03 内的分布，发现 LMP2A-CNE1（图 1-2 A）。此外，我们通过荧光酶标仪B），并进行统计学分析，发现钙离子在 L度更高。结果提示，LMP2A 表达增加钙
图 1-2 钙离子荧光指示剂标记细胞内钙离子并检测其含量荧光显微图像显示钙离子探针标记钙离子的亚细胞分布（×40 倍）。B.荧光酶标仪检测钙离，条形图统计分析。（均值±标准差，重复三次）Figure1-2 Fluorescence labeled calciumshowing the subcellular distribution of calciumFluorescence microscopic images showing the subcellular distribution of Fluo-3 labeled calciuP2A negative and positive NPC cell lines Magnification×40. B. The bar graph shows statistical anFluo-3 intensities recorded by fluorescence microplate reader (mean±s.d,n = 3).3 钙离子螯合剂（BAPTA-AM）可减少胞内游离钙离子含量。已知 EGF 刺激可促进钙离子内流，而 BAPTA-AM 抑制钙离子内流后期进一步探讨钙离子在细胞迁移过程中的作用，我们首先分析 EGF BAPTA-AM 与细胞内游离钙离子含量的关系。分别利用 BAPTA-AM（分别为 1μm/L、10μm/L），EGF（浓度分别为 100ng/ml、200ng/ml）处MP2A-CNE1 和 LMP2A-TW03 24 小时后，通过荧光酶标仪读取细胞内
本文编号：3072123
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