miR-9-5p靶向BRAF对脉络膜黑色素瘤细胞负向调控作用机制研究

发布时间：2021-03-20 10:40

　　目的:探索miR-9-5p靶向BRAF调控脉络膜黑色素瘤细胞功能的机制。方法:1、miR-9-5p对脉络膜黑色素瘤细胞功能的影响体外培养人眼侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞MUM-2B和MUM-2C,通过阳离子脂质体介导的方法,瞬时转染miR-9-5p的模拟序列（mimics）、抑制序列（inhibitor）及各自的对照序列（NC和inhibitor NC）,利用RT-qPCR检测miR-9-5p表达变化;采用EDU实验观察细胞的增殖变化;采用Transwell实验检测细胞迁移侵袭数量变化。2、miR-9-5p靶向结合BRAF并抑制BRAF的表达利用生物信息学网站TargetscanHuman7.2和microRNA.org分析预测miR-9-5p与BRAF mRNA 3’UTR区域的结合序列;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-9-5p与BRAF mRNA 3’UTR区域的结合情况;利用RT-qPCR检测BRAF mRNA的表达变化;利用Western Blotting检测BRAF蛋白表达情况。3、BRAF对野生型脉络膜黑色素瘤细胞功能的影响利用基因干扰技术,对脉络膜黑色素瘤细胞MUM-2... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

1RT-qPCR检测转染效率

中国医科大学硕士学位论文13图3.1.2.1EDU实验检测过表达miR-9-5p对脉络膜黑色素瘤细胞增殖的影响A.与NC组比较，miR-9-5pmimics组MUM-2B和MUM-2C细胞的增殖能力显著下降（400×）；B.不同分组细胞的增殖变化均具有统计学意义。***P<0.001,*P<0.05。

中国医科大学硕士学位论文14图3.1.2.2EDU实验检测过表达miR-9-5p对脉络膜黑色素瘤细胞增殖的影响A.与inhibitorNC组比较，miR-9-5pinhibitor组MUM-2B和MUM-2C细胞的增殖能力显著提高（400×）；B.不同分组细胞的增殖变化均具有统计学意义。**P<0.01,*P<0.05。3.1.3Transwell检测miR-9-5p对脉络膜黑色素瘤细胞迁移及侵袭的影响本研究为继续探索miR-9-5p对脉络膜黑色素瘤迁移和侵袭的影响，进行了Transwell实验，结果如图3.1.3所示：miR-9-5pmimics组脉络膜黑色素瘤细胞较NC组细胞迁移侵袭数量明显减少，而miR-9-5pinhibitor组脉络膜黑素瘤细胞较inhibitorNC组细胞迁移侵袭数量显著增加，****P<0.0001,***P<0.001,**P<0.01，*P<0.05。综上表明miR-9-5p负向调控脉络膜黑色素瘤细胞的迁移和侵袭。


本文编号：3090865