人晶状体上皮细胞中miR-23b-3p通过抑制SIRT1调控细胞凋亡与自噬机制的研究

发布时间：2021-04-16 23:33

　　目的:年龄相关性白内障是一种主要的致盲眼病而且其发生率呈逐年递增趋势。氧化应激在白内障的致病机制中起到了重要的作用。在氧化应激的作用下,晶状体上皮细胞的凋亡机制被激活,它可以导致晶状体的浑浊并加速白内障的发展。同时在氧化应激条件下细胞自噬机制也被激活。miRNA曾有文献报道与白内障的发生具有相关性,但其具体机制还不是很清楚。本文主要针对氧化应激条件下晶状体上皮细胞中miRNA对于晶状体上皮细胞凋亡及自噬机制的研究。研究方法:本研究选取了眼科就诊并进行白内障手术的患者32人,按年龄分为高低年龄两组,qPCR测量目的miRNA的含量分析差异性;选取人晶状体上皮细胞系,采用过氧化氢制造氧化应激模型,采用质粒转染等方式观察在细胞氧化应激条件下待测miRNA的表达情况,同时采用流式细胞检查分析凋亡及蛋白质免疫印迹方法分析自噬相关蛋白情况,分析其对凋亡与自噬影响;软件预测miRNA的靶基因,并采用荧光素酶实验验证结合位点,设计质粒分组共转染氧化应激细胞系模型观察miRNA通过靶基因调控细胞凋亡与自噬。结果:本研究观察到在过氧化氢处理的白内障组织及晶状体上皮细胞中有miR-23b-3p表达,这说明在... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：62 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

实时定量PCR检测年龄≥65岁组（N=18）与年龄<65岁组（N=14）样本中miR-23b-3pmiR‐23b‐3p

10中国医科大学博士学位论文3结果表1临床样本采集患者的一般状况2临床标本不同分组中miR‐23b‐3p的差异见图1图1：实时定量PCR检测年龄≥65岁组（N=18）与年龄<65岁组（N=14）样本中miR-23b-3p的表达情况。3采用MTT比色法测量不同浓度过氧化氢(0-300μM)处理下细胞系SRA01/04的活性比较见图2≥65岁组<65岁组平均年龄75.8354.29男108女86图2：采用MTT比色法测量细胞系SRA01/04的活性比较（过氧化氢处理下）。miR‐23b‐3p

11中国医科大学博士学位论文4人晶状体上皮细胞氧化应激模型中miR-23b-3p的表达情况（正常细胞系为对照组）见图34讨论为了探究miR-23b-3p在白内障致病机制上的作用，本实验采用实时定量PCR分析miR-23b-3p在白内障组织中的表达情况，对32例临床标本按年龄分为两组，分组标准为按照世界卫生组织对于老年的定义为65岁为界，分为年龄≥65岁组与年龄＜65岁组；两组年龄性别无差异，发现在本样本中miR-23b-3p的表达在年龄≥65岁组要高于年龄＜65岁组（见图1），这说明了在本样本中miR-23b-3p与年龄的相关性，在本样本中miR-23b-3p的表达与年龄成正相关；过氧化氢是一种氧化作用较强的活性氧，是机体自由基产生的重要环节，易于获得，性质相对稳定，经过处理的细胞能在短时间内产生大量的ＲOS，进而诱发细胞凋亡，有研究已经利用过氧化氢建立了小鼠[52]、猪[53]卵巢颗粒细胞氧化应激模型，是一种合理的颗粒细胞氧化应激诱导剂，因此我们采用了在细胞系中添加过氧化氢的经典方法制造人晶状体上皮细胞氧化应激模型，并且采用MTT比色法测量了细胞系SRA01/04在不同过氧化氢浓度下的细胞活力，得到250μM为最佳刺激浓度（见图2）。然后将细胞系SRA01/04中加入250μM过氧化氢培养24小时[54]，后可以发现miR-23b-3p的表达与正常未添加过氧化氢组比较明显增加（见图3）。说明在氧化应激条件下，人晶状体上皮细胞内miR-23b-3p的表达明显增加，结合该结果与临床标本中miR-23b-3p与年龄的正相关关系可以推断出miR-23b-3p的表达与晶状体浑浊程度即白内障严重程度的一种相关性。但具体联系还需要进一步的实验验证。图3：正常细胞系SRA01/04与250μM过氧化氢处理24小时后的细胞系SRA01/04系中miR‐23b‐3p的表达情况比较。miR-23b-3p


本文编号：3142375