胸腺基质淋巴细胞生成素和调节性T细胞在慢性鼻—鼻窦炎中的表达及其临床意义

发布时间：2017-04-20 20:28

  本文关键词：胸腺基质淋巴细胞生成素和调节性T细胞在慢性鼻—鼻窦炎中的表达及其临床意义，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：[研究背景和目的]慢性鼻-鼻窦炎是涉及鼻腔和鼻窦粘膜的慢性炎症性的疾病,也被称慢性鼻窦炎,发病率高且易复发,是耳鼻咽喉科常见的疾病之一,能引起患者鼻塞、流黄脓涕、嗅觉障碍、头疼等症状,使患者的生活质量降低。慢性鼻窦炎的病因、发病机制较复杂,一般认为主要的致病因素有：感染因素、变态反应因素、免疫因素、鼻腔及鼻窦解剖学异常因素等[1],同时还包括胃食管反流、外伤等因素,这些因素常交错在一起,引起鼻窦炎的发病。近十几年来,对于慢性鼻窦炎的研究有了很大突破,大量研究显示,细菌、病毒等微生物的刺激,鼻腔粘膜先天性免疫的改变,都会影响T细胞反应(Th1/Th2/Thl7/Tregs)、炎性细胞浸润(嗜酸性粒细胞/嗜中性粒细胞等)、鼻腔粘膜的组织重塑。胸腺基质淋巴生成素(thymic stromal lymphopoietin, TSLP)是一种与免疫有关的具有独特活性的新型细胞因子,是1944年Friend等首先从胸腺基质细胞分离提取出来的。而后研究发现TSLP还可由上皮细胞分泌,当抗原刺激支气管上皮细胞、肥大细胞、皮肤的角化细胞、基质细胞、肺成纤维细胞时[2],TSLP的表达将上调,进而作用于树突状细胞(Dendritic cells, DC/DCs),诱导CD4+T细胞向Th2方向分化,促进Th2细胞生成,并诱导Th2细胞生成大量Th2型细胞因子IL-4、5、13等,使T细胞亚群Th1/Th2/Thl7/Tregs的平衡被打破,触发并扩大炎症反应。同时TSLP能够通过活化树突状细胞诱导CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(regulatory T cells, Tregs/Treg cells)的分化成熟,调节性T细胞具有免疫耐受、免疫抑制的作用,能够维持机体的免疫稳态[3],对细菌、病毒等感染所激发的免疫反应均有抑制作用,能通过细胞接触的方式抑制T细胞及B细胞的炎症反应[4]；或通过分泌IL-10和TGF-β发挥抑制功能,因此在慢性鼻窦炎的发生、发展和复发中都起到重要作用。本实验旨在观察胸腺基质淋巴细胞生成素及CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞在慢性鼻窦炎中的表达,探讨二者在慢性鼻-鼻窦炎发生发展过程中可能的作用机制。[研究方法]采集标本来源于我科2013年9月至2014年5月期间住院的慢性鼻炎或慢性鼻-鼻窦炎患者,共53例,慢性鼻窦炎组共25例,在行鼻窦开放手术时,取炎症病变的鼻窦粘膜；对照组28例,为同一时期行鼻中隔偏曲矫正术和下鼻甲部分切除手术的慢性鼻炎患者,在行鼻甲手术时,取部分下鼻甲粘膜。采集的鼻腔粘膜组织均一式两份,均于0.9%的生理盐水中洗去血迹。一份迅速放置于RNALater中,并于-80℃冰箱中保存,用于qRT-PCR分析,分别检测各样本中FOXP3 mRNA和TSLP mRNA的表达,Foxp3是特异性表达于调节性T细胞的转录因子,是其发育和功能维持的关键性调节基因[5],可以用来标记调节性T细胞,通过检测FOXP3 mRNA的表达,可以反映出调节性T细胞的表达。通过PCR结果,分析TSLP和Treg细胞分别在慢性鼻窦炎患者鼻窦粘膜组织与慢性鼻炎患者下鼻甲粘膜中表达的差异,并将二者的表达行相关性分析,初步明确二者的相关关系；另一份置于甲醛溶液中,用于HE染色及免疫组化检测。样本均包埋、切片后行HE染色,观察慢性鼻窦炎患者鼻窦粘膜组织与慢性鼻炎患者下鼻甲粘膜的差异。同时行免疫组化染色计数调节性T细胞、TSLP染色阳性细胞数量,通过免疫组化结果分析TSLP与Treg细胞在慢性鼻窦炎患者的鼻窦粘膜中的相关性。免疫组织化学阳性标准及细胞计数：两人采用双盲法进行计数,先于低倍视野下观察后(×100),再随机选取3个高倍视野进行计数(×400),分别数出视野中细胞核或细胞质呈棕褐色或棕黄色染色的细胞个数及视野中所有的炎性细胞数,计算阳性细胞与炎性细胞总数的百分比,并取平均值。[结果]① 对照组下鼻甲粘膜TSLP mRNA表达量为(1.0502±0.9453),慢性鼻窦炎的鼻窦粘膜TSLP mRNA表达量为(1.4438±0.1704),与对照组下鼻甲粘膜相比明显升高,差异有统计学意义(P=0.0340.05)。② 对照组下鼻甲粘膜FOXP3 mRNA的表达量为(0.8992±0.3368)；慢性鼻窦炎的鼻窦粘膜FOXP3 mRNA的表达量为(2.2987±0.3569),与对照组下鼻甲粘膜相比升高,差异有统计学意义((P=0.010.05)。③ 以TSLP mRNA的表达量为自变量,FOXP3 mRNA的表达量为因变量,经Spearman相关性分析二者呈正相关关系(r=0.9773,P0.005)。④ 免疫组化染色可见调节性T细胞、TSLP均为细胞质或细胞核染色,呈棕黄色或褐色颗粒。慢性鼻窦炎粘膜中调节性T细胞占炎性细胞总数百分比为(0.2550±0.05734),TSLP阳性染色细胞占炎性细胞总数百分比为(0.3160±0.75233)。以TSLP阳性染色细胞计数占炎性细胞总数的百分比为自变量,调节性T细胞计数占总炎性细胞百分比为因变量,经Spearman相关性分析二者呈正相关关系(r=0.7378,P0.005)。[结论及研究意义]通过实验我们发现,与慢性鼻炎患者相比,慢性鼻窦炎患者的鼻窦粘膜中TSLP与Treg细胞无论是在mRNA水平还是在蛋白水平都表达升高,而且二者呈正相关关系,提示我们在慢性鼻窦炎中,TSLP可能通过诱导调节性T细胞的发育和增殖,维持免疫自稳,参与慢性鼻窦炎的发生发展过程,这将有助于进一步揭示慢性鼻窦炎的发病机制,使我们更好的掌握和利用二者的调控,调节致炎因素与抗炎因素达到相对平衡的状态,为慢性鼻窦炎的防治提供新思路和方法。
【关键词】：慢性鼻-鼻窦炎 胸腺基质淋巴细胞生成素 调节性T细胞 FOXP3
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R765.21
【目录】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 符号说明13-14
• 前言14-18
• 材料与方法18-24
• 结果24-25
• 讨论25-35
• 结论35-36
• 附图36-39
• 参考文献39-44
• 致谢44-45
• 攻读硕士学位期间发表文章45-46
• 附件46

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1 朱慧涛;胸腺基质淋巴细胞生成素和调节性T细胞在慢性鼻—鼻窦炎中的表达及其临床意义[D];山东大学;2015年

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本文编号：319477