瞬时受体电位黏蛋白-1对实验性视网膜脱离后光感受器细胞死亡的作用及其机制研究

发布时间：2021-05-20 06:58

　　目的:瞬时受体电位黏蛋白-1（TRPML1）在视网膜组织含量较高,其中在外核层表达量最高。它不仅介导自噬激活和活性氧清除,其缺失还会导致光感受器细胞损伤以及视网膜营养不良。本实验通过大鼠视网膜脱离模型的建立以及TRPML1激动剂ML-SA1的干预,研究瞬时受体电位黏蛋白-1对实验性视网膜脱离后光感受器细胞的作用及其机制。方法:首先将健康雄性SD大鼠随机分为正常组（Normal）、单纯视网膜脱离对照组（RD）、激动剂溶剂对照组（DMSO）、激动剂组（ML-SA1）。除Normal组外,其余三组均通过视网膜下注射透明质酸钠建立视网膜脱离模型;在模型建立的同时,使用微量进样器将DMSO和ML-SA1分别注入到DMSO组和ML-SA1组大鼠的视网膜下方;通过苏木精—伊红染色（HE）观察各组视网膜外核层（ONL）的厚度变化情况;通过透射电子显微镜（TEM）检测各组光感受器细胞的形态;通过荧光酶标仪和荧光探针检测各组活性氧（ROS）的表达情况;通过免疫蛋白印迹法（Western blot）检测各组TRPML1、自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin1、凋亡相关蛋白Cleaved casp... 

【文章来源】：皖南医学院安徽省

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
前言
研究材料(资料、内容)与方法
    1. 实验性大鼠RD模型构建及视网膜下腔注药
        1.1 实验动物
        1.2 实验所需试剂和器材
        1.3 实验模型构建及药物注射操作步骤
    2. 苏木精-伊红染色(HE staining)
        2.1 实验所需试剂和器材
        2.2 HE染色操作步骤
    3. 透射电子显微镜(Transmission electron microscope)
        3.1 实验所需试剂和器材
        3.2 透射电子显微镜操作步骤
    4. 免疫蛋白印迹法(Western blot)
        4.1 实验所需试剂和器材
        4.2 电泳凝胶及部分试剂配方
        4.3 Western blot实验步骤
    5. 活性氧检测(ROS assay)
        5.1 活性氧检测所需试剂和器材
        5.2 活性氧检测实验步骤
    6. 水迷宫实验(Morries water maze)
        6.1 水迷宫实验所需试剂和器材
        6.2 水迷宫实验步骤
    7.实验结果数据分析
结果
    1.ML-SA1对实验性视网膜脱离后视网膜组织具有保护作用
    2.ML-SA1对实验性视网膜脱离后光感受器细胞具有保护作用
    3.ML-SA1通过增强TRPML1的功能促进活性氧的清除
    4.TRPML1激活自噬并减少光感受器细胞Caspase依赖性凋亡
    5.ML-SA1可以改善大鼠视功能依赖性行为
讨论
结论
参考文献
综述
    参考文献
作者简介及读研期间主要科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Activation of autophagy in photoreceptor necroptosis after experimental retinal detachment[J]. Kai Dong,Zi-Cheng Zhu,Feng-Hua Wang,Gen-Jie Ke,Zhang Yu,Xun Xu.  International Journal of Ophthalmology. 2014(05)



本文编号：3197315