EPO对大鼠螺旋神经元损伤保护及其分子机理初步研究

发布时间：2021-05-25 20:12

　　目的感音神经性聋是耳科学领域难点及热点问题。内耳螺旋神经元（spiral ganglion neurons,SGNs）的凋亡是导致感音神经性聋的主要因素之一,促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）被认为在脑、脊髓等中枢神经系统广泛表达并具有神经保护作用,但在大鼠内耳是否表达,以及对内耳SGNs是否具有神经保护作用则不清楚。探讨EPO在大鼠内耳螺旋神经元兴奋毒性损伤中的作用及相关机制,为SGNs的兴奋毒性损伤保护提供新的理论。材料与方法1、通过免疫组织化学、荧光激光共聚焦扫描荧光显微镜技术明确EPO在内耳中有无表达情况。2、分离大鼠耳蜗及体外培养SGNs并鉴定。3、采用不同浓度谷氨酸（0,10,25,50,75,100μmol/L）分别作用于培养48小时的螺旋神经元,MTT、TUNEL法分别检测SGNs的细胞活力、细胞凋亡。4.构建重组腺病毒载体Ad-EPO并转染到体外培养的SGNs,选择0,20,50,100,150,250PFU的不同感染复数（MOI）及24h,48h和72h的不同感染时长,通过报告基因绿色荧光蛋白（GFP）表达检测感染率,确定最佳感染倍数和病毒表达时... 

【文章来源】：中国人民解放军陆军军医大学重庆市

【文章页数】：168 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
缩略语表
英文摘要
中文摘要
第一章 前言
第二章 EPO与EPO-R在大鼠内耳的表达
    2.1 实验材料
    2.2 实验方法
    2.3 结果
    2.4 讨论
    2.5 小结
第三章 螺旋神经元培养及体外兴奋毒性损伤模型构建
    3.1 实验材料
    3.2 实验方法
    3.3 结果
    3.4 讨论
    3.5 小结
第四章 EPO对螺旋神经元兴奋毒性损伤影响的实验研究
    4.1 EPO重组腺病毒载体对螺旋神经元兴奋毒性损伤作用的影响
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 实验方法
        4.1.3 结果
        4.1.4 小结
    4.2 EPO特异性sh RNA对螺旋神经元兴奋毒性损伤作用的影响
        4.2.1 实验材料
        4.2.2 实验方法
        4.2.3 结果
        4.2.4 小结
    4.3 讨论
    4.4 总结
第五章 EPO对螺旋神经元兴奋毒性损伤影响的分子机理初步研究
    5.1 实验材料
    5.2 实验方法
    5.3 结果
    5.4 讨论
    5.5 小结
全文结论
参考文献
文献综述 促红细胞生成素在中枢神经系统的神经保护作用及分子机制
    参考文献
攻读学位期间的研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]螺旋神经节神经元原代培养及其免疫细胞化学鉴定[J]. 孙建军.  中华耳鼻咽喉科杂志. 1998(04)
[2]神经组织的体外培养方法[J]. 薛庆善,冯武鸣.  解剖科学进展. 1996(04)



本文编号：3205939