MicroRNA-200c调控DACH1经由Wnt/β-catenin信号通路促进鼻咽癌细胞的增殖和迁移

发布时间：2021-05-25 20:18

　　目的旨在探索microRNA-200c（miR-200c）对鼻咽癌细胞增殖和迁移的影响,探索miR-200c下游靶基因以及二者之间的靶向调控关系,从而阐明miR-200c对鼻咽癌生物学功能影响的具体分子调控机制。方法1.RT-qPCR方法检测miR-200c在鼻咽癌组织及细胞系中的表达。2.构建并验证miR-200c抑制性载体miR-200c-inhibitor（miR-200c-in）转染效率。3.MTT和平板克隆形成实验检测miR-200c对肿瘤细胞增殖能力的影响。4.Transwell和划痕实验检测miR-200c对肿瘤细胞迁移能力的影响。5.靶基因预测及筛选,荧光素酶报告实验验证miR-200c的下游靶基因。6.RT-qPCR和Western blotting检测miR-200c靶基因DACH1的mRNA和蛋白表达。7.Western blotting检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达。结果1.miR-200c在鼻咽癌组织及细胞系中的表达情况:我们检测了36对鼻咽癌组织和邻近的正常组织,结果表明:miR-200c在癌组织中的表达明显高于正常组织。同时,与正常鼻... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：101 页

【学位级别】：博士

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前言
    1.鼻咽癌
        1.1 鼻咽癌的病因和临床表现
        1.2 鼻咽癌的病理变化
        1.3 鼻咽癌相关肿瘤标志物
        1.4 鼻咽癌的治疗
    2.微小RNA（micro-RNA，miRNA）
        2.1 微小RNA（miRNA）的概述
        2.2 miRNA的基因组定位及作用
        2.3 miRNA与恶性肿瘤
    3.micro-RNA与鼻咽癌
        3.1 鼻咽癌中的miRNA的研究进展
        3.2 miRNA-200 家族
    4.本研究需要解决的问题
第一部分 miR-200c在鼻咽癌中的表达及其对肿瘤细胞增殖和迁移的影响
    1 实验材料
        1.1 组织标本
        1.2 细胞株
        1.3 主要仪器设备
        1.4 主要试剂材料
    2 实验方法
        2.1 0.25%胰酶消化液-EDTA的配制
        2.2 鼻咽癌细胞的复苏、换液、传代、冻存
        2.3 细胞转染
        2.4 实时定量PCR
        2.5 MTT实验
        2.6 平板克隆形成实验
        2.7 Transwell实验
        2.8 划痕实验
        2.9 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 总RNA提取及质量鉴定
        3.2 miRNA表达结果分析
        3.3 在鼻咽癌组织和细胞系中检测miR-200c
        3.4 miR-200c inhibitor的转染效率验证
        3.5 miR-200c对肿瘤细胞增殖能力的影响
        3.6 miR-200c对肿瘤细胞增殖能力的影响
        3.7 miR-200c对肿瘤细胞迁移能力的影响
    4.讨论
第二部分 miR-200c靶基因的预测与验证
    1 实验材料
        1.1 细胞株
        1.2 主要仪器
        1.3 主要试剂
        1.4 主要试剂的配制
    2 实验方法
        2.1 生物信息学预测分析
        2.2 pMIR-Report-DACH1/mut-3’UTR重组质粒的构建
        2.3 RT-qPCR检测DACH1转染miR-200c-in后mRNA表达
        2.4 W-B实验验证DACH1转染miR-200c-in后蛋白表达
    3.实验结果
        3.1 双荧光素酶实验结果分析
        3.2 DACH1 mRNA的表达情况
        3.3 DACH1蛋白的表达情况
    4.讨论
第三部分 miR-200c靶向调控DACH1经由Wnt/β-catenin信号通路促进鼻咽癌细胞增殖和迁移的机制研究
    1 实验材料
        1.1 细胞株
        1.2 主要仪器
        1.3 主要试剂
        1.4 主要试剂的制备
    2 实验方法
        2.1 细胞培养
        2.2 W-B实验检测Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达
    3.实验结果
        3.1 miR-200c低表达对c-Myc蛋白的影响
        3.2 miR-200c低表达Wnt/β-catenin信号通路的影响
    4.讨论
结论
参考文献
附录
致谢
综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]应用微阵列芯片分析结肠癌组织中miRNA差异性表达[J]. 马钦,杨烈,王存,于永扬,周斌,周总光.  四川大学学报(医学版). 2011(03)
[2]The prevalence and prevention of nasopharyngeal carcinoma in China[J]. Malcolm J. Simons.  癌症. 2011(02)

硕士论文
[1]Wnt/β-catenin信号转导通路在人参多糖诱导人鼻咽癌细胞凋亡中所起作用的实验研究[D]. 范家铭.重庆医科大学 2014



本文编号：3205946