miR-9-5P靶向CDH1、CTNNA1和ITGA6对脉络膜黑色素瘤细胞功能的影响

发布时间：2021-06-27 16:54

　　目的探讨miR-9-5P对脉络膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡及迁移、侵袭的调控作用,并探寻其发挥作用的靶基因CDH1,CTNNA1和ITGA6。方法体外给予脉络膜黑色素瘤细胞转染阴性对照（NC）和miR-9-5p mimics。采用RTCA实时增殖实验检测细胞的增殖情况;EDU实验进一步检测细胞的增殖变化;流式细胞技术检测细胞的凋亡变化;Transwell实验观察细胞迁移和侵袭能力的变化情况;Targetscan生物信息学网站分析预测miR-9-5P的靶基因,并通过GO分类和KEGG富集分析找到与迁移和侵袭相关靶基因;Western blotting检测CDH1蛋白表达情况。结果 RTCA实时增殖实验结果显示,miR-9-5p能够抑制脉络膜黑色素瘤细胞MUM-2B （t=6.925,P <0.05）及MUM-2C （t=4.762,P <0.05）的增殖;EDU实验结果显示,miR-9-5p能够抑制脉络膜黑色素瘤细胞MUM-2B （t=4.779,P <0.05）和MUM-2C （t=4.514,P <0.05）的增殖;流式细胞检测结果表明,miR-9-5p能够促进脉... 

【文章来源】：中国医科大学学报. 2020,49(10)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【图文】：

mi R-9-5p对脉络膜黑色素瘤细胞增殖的影响

采用流式细胞仪检测各组脉络膜黑色素瘤细胞的凋亡变化情况。如图2所示，与NC组相比，MUM-2B (t=7.385）和MUM-2C (t=4.893）细胞转染mi R-9-5p mimics后凋亡率明显增加，差异有统计学意义（P<0.001），见图2A、2B。脉络膜黑色素瘤细胞的凋亡水平与mi R-9-5p的表达量呈正相关，表明mi R-9-5p能够促进脉络膜黑色素瘤细胞的凋亡。2.3 mi R-9-5p能够参与调控脉络膜黑色素瘤细胞的迁移和侵袭

mi R-9-5p在多种肿瘤中发挥着促进因子或抑制因子的作用[16-19]，但它在脉络膜黑色素瘤中的作用机制目前尚不明确。因此，本研究通过在脉络膜黑色素瘤细胞中过表达mi R-9-5p，发现mi R-9-5p表达上调能够抑制脉络膜黑色素瘤细胞的增殖、迁移和侵袭，并促进脉络膜黑色素瘤细胞的凋亡。为了更加深入地研究mi R-9-5p在脉络膜黑色素瘤细胞中的作用机制及途径，本研究利用生物信息学网站Targetscan Human7.2分析预测了mi R-9-5p的全部可能靶基因。随后利用GO分类富集分析及KEGG通路分析上述预测靶基因，筛选得到了3个与细胞迁移和侵袭相关的基因CDH1,CTNNA1和ITGA6。最后以Western blotting初步验证了CDH1是mi R-9-5p的靶基因之一。CDH1和CTNNA1属于钙黏着蛋白家族，介导细胞与细胞间的黏附，与上皮-间质转化引起的侵袭性增加有关[20-21]。ITGA6能促进肿瘤细胞的侵袭转移[22]。因此，推测mi R-9-5p可能通过调节上述基因的表达影响脉络膜黑色素瘤细胞的发生与发展。图4 Western blotting检测CDH1蛋白表达情况


本文编号：3253233