小檗碱在高糖环境下对人视网膜血管内皮细胞的增殖及VEGF表达的影响
发布时间：2021-09-05 03:33
目的:研究不同浓度小檗碱（Berberine,BBR）在高糖环境下对体外培养的人视网膜血管内皮细胞（Human retina vascμLar endothelial cells,HRCECs）增殖及血管内皮生长因子（VascμLar endothelial growth factor,VEGF）表达的影响。方法:以人眼球提取的视网膜血管内皮细胞用作研究对象,在高糖培养基内模拟糖尿病环境建立人视网膜血管内皮细胞模型,运用免疫荧光法进行视网膜血管内皮细胞鉴定。实验分为低糖组、高糖组、高糖+5μmol/L小檗碱组、高糖+10μmol/L小檗碱组、高糖+20μmol/L小檗碱组、高糖+40μmol/L小檗碱组。HRCECs经不同浓度药物处理后,分别于加药后12小时、24小时、36小时采用MTT法检测药物在高糖环境下对HRCECs增殖的影响,采用免疫印记法检测不同浓度药物对HRCECs中VEGF的表达量的影响。结果:1.MTT结果显示:（1）HRCECs在体外培养12小时、24小时、36小时后低糖组细胞数量明显少于高糖组细胞数量,具有统计学差异（P<0.05）;（2）当小檗碱在高糖环境下...
【文章来源】：南华大学湖南省
【文章页数】：45 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
体外培养的视网膜血管内皮细
4.1 视网膜血管内皮细胞的培养刚刚提取出来的视网膜血管内皮细胞中混有质细胞、周细胞、白细胞等杂质细胞，培养 1 天后梭状的血管内皮细胞开始贴壁,培养大概 1 周后观察到血管内皮细胞经过克隆生长、细胞分裂开始有细胞集落形成。选用有利于视网膜血管内皮生长细胞生存的 DMEM 培养液，使内皮细胞能够快速生长，杂质细胞逐渐死亡漂浮而在换液时被除去。培养 2 周时观察到血管内皮细胞融合生长呈铺路石样铺满培养皿底(图 4.1)，当观察到细胞出现接触却制时，以 1:2 传代。4.2 视网膜血管内皮细胞的鉴定利用免疫荧光法检测：经兔抗人 vWF 抗体染色，视网膜血管内皮细胞膜及胞浆特异性染色呈绿色，非特异性染色的细胞核呈蓝色，阳性细胞着色 95.8%，视网膜血管内皮细胞体外培养成功。(图 4.2)
图 4.3 小檗碱对高糖环境下视网膜血管内皮细胞增殖的影响（注：浓度为 5、10、20、40μmol/L小檗碱对体外高糖环境下 HRCECs 作用 12、24、36 小时，与高糖组对比：*P＜0.05，**P＜0.05）4.4 小檗碱对体外视网膜血管内皮细胞中 VEGF 的表达影响视网膜血管内皮细胞在体外高糖环境下培养成功后，加入不同浓度小檗碱药物处理，细胞中 VEGF 表达量用免疫印迹法检测，结果示：(1)与低糖对照组相比，高糖对照组血管内皮细胞在体外高糖环境下培养 12 小时、24 小时、36 小时后，VEGF 表达均多于低糖组，具有统计学差异(P<0.05)。(2)当同一浓度小檗碱对 HRCECs 分别作用 12、24、48 小时后，血管内皮细胞中 VEGF 表达量均有减量，且作用时间越长差异越大(P<0.05)；（3）不同浓度小檗碱（5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L）对高糖环境下 HRCECs 作用时间相同时，较不加药组细胞中 VEGF 表达均有减量，且小檗碱浓度越高抑制作用越强(P<0.05)，且不同浓
【参考文献】：
期刊论文
[1]PEDF对氧诱导视网膜病变小鼠视网膜MCP-1表达的影响[J]. 王亚娜,张磊. 国际眼科杂志. 2019(01)
[2]黄酮类化合物干预糖尿病视网膜病变的研究进展[J]. 黄永杰,李锋,李大鹏. 食品科学. 2019(19)
[3]Arresten在氧诱导小鼠视网膜新生血管形成中的抑制作用及机制[J]. 陈珊珊,杨中伊,李姝蓉,刘桥生,付书华. 眼科新进展. 2018(12)
[4]小檗碱抗肿瘤机制研究[J]. 于奇,冯海. 哈尔滨医科大学学报. 2018(03)
[5]小檗碱抗炎活性在糖尿病和肿瘤中的应用进展[J]. 刘倩,傅缨,熊耀斌,资晓飞,李媛. 实用临床医学. 2018(03)
[6]四氢小檗碱药理作用研究进展[J]. 季宇彬,刘欣,于蕾,窦利民,张小坡. 中草药. 2017(24)
[7]黄连素调控胰岛素抵抗相关2型糖尿病的研究进展[J]. 李骋,何金枝,周学东,徐欣. 中国中药杂志. 2017(12)
[8]糖尿病视网膜病变的流行病学研究现状[J]. 刘家燕,樊映川. 实用医院临床杂志. 2015(02)
[9]康柏西普玻璃体腔注射对糖尿病视网膜病变患者视力的影响[J]. 韩姬,王玲,刘伟仙,孙宏亮,蔡维. 中国全科医学. 2015(05)
[10]小檗碱的分析方法及药理作用研究进展[J]. 丁南南,童珊珊,丁丽霞,徐希明,余江南. 药物分析杂志. 2012(07)
硕士论文
[1]中药成分小檗碱抗肿瘤新生血管形成作用的研究[D]. 刘岩.湖北中医药大学 2015
本文编号：3384586
【文章来源】：南华大学湖南省
【文章页数】：45 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
体外培养的视网膜血管内皮细
4.1 视网膜血管内皮细胞的培养刚刚提取出来的视网膜血管内皮细胞中混有质细胞、周细胞、白细胞等杂质细胞，培养 1 天后梭状的血管内皮细胞开始贴壁,培养大概 1 周后观察到血管内皮细胞经过克隆生长、细胞分裂开始有细胞集落形成。选用有利于视网膜血管内皮生长细胞生存的 DMEM 培养液，使内皮细胞能够快速生长，杂质细胞逐渐死亡漂浮而在换液时被除去。培养 2 周时观察到血管内皮细胞融合生长呈铺路石样铺满培养皿底(图 4.1)，当观察到细胞出现接触却制时，以 1:2 传代。4.2 视网膜血管内皮细胞的鉴定利用免疫荧光法检测：经兔抗人 vWF 抗体染色，视网膜血管内皮细胞膜及胞浆特异性染色呈绿色，非特异性染色的细胞核呈蓝色，阳性细胞着色 95.8%，视网膜血管内皮细胞体外培养成功。(图 4.2)
图 4.3 小檗碱对高糖环境下视网膜血管内皮细胞增殖的影响（注：浓度为 5、10、20、40μmol/L小檗碱对体外高糖环境下 HRCECs 作用 12、24、36 小时，与高糖组对比：*P＜0.05，**P＜0.05）4.4 小檗碱对体外视网膜血管内皮细胞中 VEGF 的表达影响视网膜血管内皮细胞在体外高糖环境下培养成功后，加入不同浓度小檗碱药物处理，细胞中 VEGF 表达量用免疫印迹法检测，结果示：(1)与低糖对照组相比，高糖对照组血管内皮细胞在体外高糖环境下培养 12 小时、24 小时、36 小时后，VEGF 表达均多于低糖组，具有统计学差异(P<0.05)。(2)当同一浓度小檗碱对 HRCECs 分别作用 12、24、48 小时后，血管内皮细胞中 VEGF 表达量均有减量，且作用时间越长差异越大(P<0.05)；（3）不同浓度小檗碱（5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L）对高糖环境下 HRCECs 作用时间相同时，较不加药组细胞中 VEGF 表达均有减量，且小檗碱浓度越高抑制作用越强(P<0.05)，且不同浓
【参考文献】：
期刊论文
[1]PEDF对氧诱导视网膜病变小鼠视网膜MCP-1表达的影响[J]. 王亚娜,张磊. 国际眼科杂志. 2019(01)
[2]黄酮类化合物干预糖尿病视网膜病变的研究进展[J]. 黄永杰,李锋,李大鹏. 食品科学. 2019(19)
[3]Arresten在氧诱导小鼠视网膜新生血管形成中的抑制作用及机制[J]. 陈珊珊,杨中伊,李姝蓉,刘桥生,付书华. 眼科新进展. 2018(12)
[4]小檗碱抗肿瘤机制研究[J]. 于奇,冯海. 哈尔滨医科大学学报. 2018(03)
[5]小檗碱抗炎活性在糖尿病和肿瘤中的应用进展[J]. 刘倩,傅缨,熊耀斌,资晓飞,李媛. 实用临床医学. 2018(03)
[6]四氢小檗碱药理作用研究进展[J]. 季宇彬,刘欣,于蕾,窦利民,张小坡. 中草药. 2017(24)
[7]黄连素调控胰岛素抵抗相关2型糖尿病的研究进展[J]. 李骋,何金枝,周学东,徐欣. 中国中药杂志. 2017(12)
[8]糖尿病视网膜病变的流行病学研究现状[J]. 刘家燕,樊映川. 实用医院临床杂志. 2015(02)
[9]康柏西普玻璃体腔注射对糖尿病视网膜病变患者视力的影响[J]. 韩姬,王玲,刘伟仙,孙宏亮,蔡维. 中国全科医学. 2015(05)
[10]小檗碱的分析方法及药理作用研究进展[J]. 丁南南,童珊珊,丁丽霞,徐希明,余江南. 药物分析杂志. 2012(07)
硕士论文
[1]中药成分小檗碱抗肿瘤新生血管形成作用的研究[D]. 刘岩.湖北中医药大学 2015
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