补肾活血中药血清对加压纯化培养视网膜神经节细胞PI3K/AKT信号转导通路的影响
发布时间：2021-10-26 02:35
目的研究补肾活血中药血清对加压纯化培养视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells,RGCs）凋亡模型PI3K/Akt信号转导通路主要成员PI3K及Akt表达的影响,探索补肾活血法保护RGCs的机制。方法制备补肾活血中药含药血清,体外纯化SD大鼠RGCs,采取开放式压力控制培养系统建立体外加压培养RGCs凋亡模型,以50g·L-1、100 g·L-1、200 g·L-1血清浓度梯度补肾活血中药血清分别处理。将RGCs分为5组,分别为正常培养组（N组）、对照组（C组）、50 g·L-1补肾活血中药血清组(50 g·L-1BSHX组)、100 g·L-1补肾活血中药血清组(100 g·L-1BSHX组)、200g·L-1补肾活血中药血清组(200 g·L-1BSHX组),Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测补肾活血中药血...
【文章来源】：眼科新进展. 2017,37(09)北大核心
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
纯化培养ＲGCs形态学及Thy1．1免疫荧光鉴定结果
(0．22±0.01)、200g·L－1BSHX组(0．84±0．10)与C组相比，PI3KmＲNA含量逐渐升高，差异均有统计学意义(均为P＜0．05)，提示补肾活血中药含药血清可提升PI3K在ＲGCs中的转录水平。图2补肾活血中药血清对加压纯化培养大鼠ＲGCs凋亡的影响。A:N组;B:C组;C:50g·L－1BSHX组;D:100g·L－1BSHX组;E:200g·L－1BSHX组2．4各组ＲGCs中AktmＲNA表达比较各组ＲGCs相对表达定量值结果表明，C组细胞AktmＲ-NA(0.04±0．01)表达较N组(1．00±0．04)明显降低，差异有统计学意义(P＜0．05)，而50g·L－1BSHX组(0．21±0．02)、100g·L－1BSHX组(0．36±0.01)、200g·L－1BSHX组(1．07±0．17)细胞AktmＲNA表达均高于无含药血清的C组，且与C组相比差异均有统计学意义(均为P＜0．05)，提示补肾活血中药含药血清可提升Akt在ＲGCs中的转录水平。2．5各组ＲGCs的PI3K及Akt蛋白表达比较与N组比较，C组PI3K蛋白表达显著降低，差异有统计学意义(P＜0．05)，而50g·L－1、100g·L－1、200g·L－1BSHX组与C组相比，PI3K蛋白表达量逐渐升高，且100g·L－1、200g·L－1BSHX组与C组相比差异均有统计学意义(均为P＜0．05，见图3、表1)。C组Akt蛋白表达与N组相比显著降低(P＜0.05)，而50g·L－1、100g·L－1、200g·L－1BSHX组与C组相比，Akt蛋白表达量逐渐升高，且差异均有统计学意义(均为P＜0．05，见图3、表1)。图3各组体外培养大鼠ＲGC中的PI3K、Akt蛋白表达条带图3讨论高眼压是青光眼ＲGCs凋亡的重要因素，是青光眼性视神经病变的基础，压力是青光眼的重要致病因素之一，其直接作用于ＲGCs的细胞膜，膜的通透性及跨膜物质转运受到影响而致细胞死亡，实验证表1各组体外培养大鼠ＲG
?－1BSHX组(0．36±0.01)、200g·L－1BSHX组(1．07±0．17)细胞AktmＲNA表达均高于无含药血清的C组，且与C组相比差异均有统计学意义(均为P＜0．05)，提示补肾活血中药含药血清可提升Akt在ＲGCs中的转录水平。2．5各组ＲGCs的PI3K及Akt蛋白表达比较与N组比较，C组PI3K蛋白表达显著降低，差异有统计学意义(P＜0．05)，而50g·L－1、100g·L－1、200g·L－1BSHX组与C组相比，PI3K蛋白表达量逐渐升高，且100g·L－1、200g·L－1BSHX组与C组相比差异均有统计学意义(均为P＜0．05，见图3、表1)。C组Akt蛋白表达与N组相比显著降低(P＜0.05)，而50g·L－1、100g·L－1、200g·L－1BSHX组与C组相比，Akt蛋白表达量逐渐升高，且差异均有统计学意义(均为P＜0．05，见图3、表1)。图3各组体外培养大鼠ＲGC中的PI3K、Akt蛋白表达条带图3讨论高眼压是青光眼ＲGCs凋亡的重要因素，是青光眼性视神经病变的基础，压力是青光眼的重要致病因素之一，其直接作用于ＲGCs的细胞膜，膜的通透性及跨膜物质转运受到影响而致细胞死亡，实验证表1各组体外培养大鼠ＲGCs中的PI3K、Akt蛋白表达组别PI3K蛋白Akt蛋白N组0．57±0．040．60±0．05C组0．37±0．03*0．33±0．04*50g·L－1BSHX组0．43±0．030．42±0．04#100g·L－1BSHX组0．53±0．04#0．46±0．04#200g·L－1BSHX组0．80±0．06#0．64±0．04#注:*P＜0．05vsN组，#P＜0．05vsC组明高眼压引起的筛板层间变形移位产生的剪切力阻滞视神经轴浆流于筛板水平，引起来源于上级神经元的营养物质不能顺利到达神经细胞，轴突膜不能利用线粒体产生ATP，影响轴突蛋白的生成和转运，细胞正常代谢受到损害?
【参考文献】：
期刊论文
[1]补肾活血中药对原发性青光眼术后视神经保护作用的临床研究[J]. 汪伟,李妍,刘红佶,朱新萍,李翔. 北京中医药大学学报. 2016(02)
[2]补肾活血中药对大鼠慢性高眼压模型视网膜神经节细胞PI3K/Akt信号转导通路p-Akt表达的影响[J]. 汪伟,李翔,王桃,柯欣怡,刘红佶,贾正品,牟琳. 眼科新进展. 2015(09)
[3]补肾活血中药对大鼠慢性高眼压模型外侧膝状体病理改变的影响[J]. 李翔,谢钊,郭红建,谢学军,路雪婧,王毅,王超. 眼科新进展. 2012(01)
[4]用于青光眼基础研究的开放式压力控制培养系统的研制[J]. 张虹,李贵刚,汪学方,胡维琨,谢二娟,陈莲一,单长梅,赵国宏. 中华眼科杂志. 2006(06)
本文编号：3458653
【文章来源】：眼科新进展. 2017,37(09)北大核心
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
纯化培养ＲGCs形态学及Thy1．1免疫荧光鉴定结果
(0．22±0.01)、200g·L－1BSHX组(0．84±0．10)与C组相比，PI3KmＲNA含量逐渐升高，差异均有统计学意义(均为P＜0．05)，提示补肾活血中药含药血清可提升PI3K在ＲGCs中的转录水平。图2补肾活血中药血清对加压纯化培养大鼠ＲGCs凋亡的影响。A:N组;B:C组;C:50g·L－1BSHX组;D:100g·L－1BSHX组;E:200g·L－1BSHX组2．4各组ＲGCs中AktmＲNA表达比较各组ＲGCs相对表达定量值结果表明，C组细胞AktmＲ-NA(0.04±0．01)表达较N组(1．00±0．04)明显降低，差异有统计学意义(P＜0．05)，而50g·L－1BSHX组(0．21±0．02)、100g·L－1BSHX组(0．36±0.01)、200g·L－1BSHX组(1．07±0．17)细胞AktmＲNA表达均高于无含药血清的C组，且与C组相比差异均有统计学意义(均为P＜0．05)，提示补肾活血中药含药血清可提升Akt在ＲGCs中的转录水平。2．5各组ＲGCs的PI3K及Akt蛋白表达比较与N组比较，C组PI3K蛋白表达显著降低，差异有统计学意义(P＜0．05)，而50g·L－1、100g·L－1、200g·L－1BSHX组与C组相比，PI3K蛋白表达量逐渐升高，且100g·L－1、200g·L－1BSHX组与C组相比差异均有统计学意义(均为P＜0．05，见图3、表1)。C组Akt蛋白表达与N组相比显著降低(P＜0.05)，而50g·L－1、100g·L－1、200g·L－1BSHX组与C组相比，Akt蛋白表达量逐渐升高，且差异均有统计学意义(均为P＜0．05，见图3、表1)。图3各组体外培养大鼠ＲGC中的PI3K、Akt蛋白表达条带图3讨论高眼压是青光眼ＲGCs凋亡的重要因素，是青光眼性视神经病变的基础，压力是青光眼的重要致病因素之一，其直接作用于ＲGCs的细胞膜，膜的通透性及跨膜物质转运受到影响而致细胞死亡，实验证表1各组体外培养大鼠ＲG
?－1BSHX组(0．36±0.01)、200g·L－1BSHX组(1．07±0．17)细胞AktmＲNA表达均高于无含药血清的C组，且与C组相比差异均有统计学意义(均为P＜0．05)，提示补肾活血中药含药血清可提升Akt在ＲGCs中的转录水平。2．5各组ＲGCs的PI3K及Akt蛋白表达比较与N组比较，C组PI3K蛋白表达显著降低，差异有统计学意义(P＜0．05)，而50g·L－1、100g·L－1、200g·L－1BSHX组与C组相比，PI3K蛋白表达量逐渐升高，且100g·L－1、200g·L－1BSHX组与C组相比差异均有统计学意义(均为P＜0．05，见图3、表1)。C组Akt蛋白表达与N组相比显著降低(P＜0.05)，而50g·L－1、100g·L－1、200g·L－1BSHX组与C组相比，Akt蛋白表达量逐渐升高，且差异均有统计学意义(均为P＜0．05，见图3、表1)。图3各组体外培养大鼠ＲGC中的PI3K、Akt蛋白表达条带图3讨论高眼压是青光眼ＲGCs凋亡的重要因素，是青光眼性视神经病变的基础，压力是青光眼的重要致病因素之一，其直接作用于ＲGCs的细胞膜，膜的通透性及跨膜物质转运受到影响而致细胞死亡，实验证表1各组体外培养大鼠ＲGCs中的PI3K、Akt蛋白表达组别PI3K蛋白Akt蛋白N组0．57±0．040．60±0．05C组0．37±0．03*0．33±0．04*50g·L－1BSHX组0．43±0．030．42±0．04#100g·L－1BSHX组0．53±0．04#0．46±0．04#200g·L－1BSHX组0．80±0．06#0．64±0．04#注:*P＜0．05vsN组，#P＜0．05vsC组明高眼压引起的筛板层间变形移位产生的剪切力阻滞视神经轴浆流于筛板水平，引起来源于上级神经元的营养物质不能顺利到达神经细胞，轴突膜不能利用线粒体产生ATP，影响轴突蛋白的生成和转运，细胞正常代谢受到损害?
【参考文献】：
期刊论文
[1]补肾活血中药对原发性青光眼术后视神经保护作用的临床研究[J]. 汪伟,李妍,刘红佶,朱新萍,李翔. 北京中医药大学学报. 2016(02)
[2]补肾活血中药对大鼠慢性高眼压模型视网膜神经节细胞PI3K/Akt信号转导通路p-Akt表达的影响[J]. 汪伟,李翔,王桃,柯欣怡,刘红佶,贾正品,牟琳. 眼科新进展. 2015(09)
[3]补肾活血中药对大鼠慢性高眼压模型外侧膝状体病理改变的影响[J]. 李翔,谢钊,郭红建,谢学军,路雪婧,王毅,王超. 眼科新进展. 2012(01)
[4]用于青光眼基础研究的开放式压力控制培养系统的研制[J]. 张虹,李贵刚,汪学方,胡维琨,谢二娟,陈莲一,单长梅,赵国宏. 中华眼科杂志. 2006(06)
本文编号：3458653
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