CD47对鼻咽癌细胞干性的影响及机制研究

发布时间：2022-01-05 07:09

　　背景及研究目的:鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）是一种具有独特生物学特性的恶性肿瘤。复发和转移是鼻咽癌治疗失败和死亡的主要原因。肿瘤干细胞（Cancer stemcells,CSCs）是一小群具有自我更新及多向分化潜能的肿瘤细胞,被认为是肿瘤复发和转移的“种子细胞”。CD47作为介导免疫逃逸的新型免疫检查点,其在多种恶性肿瘤表达上调,尤其在肿瘤干细胞中。抗CD47单克隆抗体也被认为是有潜力的新型抗肿瘤药物。我们的前期研究表明CD47在鼻咽癌细胞和组织中均高表达,使鼻咽癌的增殖迁移能力增强,且与不良预后有关。在本研究中我们提出CD47是维持并增强鼻咽癌干性的重要原因,最终可能促进鼻咽癌的复发及转移。材料与方法:选用鼻咽癌CNE1、CNE2、5-8F细胞株,通过无血清悬浮成球法及选取CD133为鼻咽癌干样细胞表面标志物的方法,富集鼻咽癌干样细胞,同时检测鼻咽癌干样细胞中CD47的表达水平。然后采用流式细胞术分选出CD47+和CD47-的细胞群,通过细胞功能学实验检测CD47的表达与自我更新、增殖的关系,裸鼠成瘤实验评估体内成瘤能力,经典克隆形成分析及彗星实... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１无血清悬浮成球实验??

?ｆ：?：？．公??Ａ．ＣＮＥ１?Ｂ．５－８Ｆ?Ｃ．ＣＮＥ２（１０〇ｘ）?Ｄ．ＣＮＥ２（２０〇ｘ）??图１－１无血清悬浮成球实验??Ｆｉｇ．?１－１?Ｓｅｒｕｍ－ｆｒｅｅ?ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ?ｓｐｈｅｒｅ?ｆｏｒｍａｔｉｏｎ?ａｓｓａｙ??②流式细胞术检测鼻咽癌ＣＮＥ２细胞中ＣＤ１３３的表达??我们通过流式细胞术检测了?ＣＮＥ２细胞中ＣＤ１３３的表达，结果（图１－２）显??示其表达量恒定为１％－２％。??Ａ??Ｓｐｅｃｉｍｅｎ＿Ｑ０１－Ｔｕｂｅ＿００３?１?Ｂ??Ｓｐｅｃｉｍｅｎ?００１－Ｔｕｂｅ?００８???０．４％?０．５％?＊＾０．３％?０．５％??＾?１?：??［？?Ｑ１?０＾?Ｃ?？?Ｑ１?．Ｑ２??＊？＞?？，．）？？、?．?－ｉ－．！?？＇??—＾—ａｉｒ——??０．１％?＾９７＾＊＇?１．９％??Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?ＩＩＩＩ?Ｉ?Ｉ?１?Ｉ?Ｉ?ＩＩＩＩ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?１１１１?１?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?ＩＩ?ｌ｜?？?｜?｜?Ｉ?｜１?ＩＩ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?ＩＩ?ＩＩ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?ＩＩ?ＩＩ?Ｉ?ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?ＩＩＩＩ?Ｉ??１〇?，〇?ＰＥ－Ａ?，〇?，〇?，〇２?，〇?ＰＥ－Ａ?１〇?，〇??Ａ．ＰＥ?Ｍｏｕｓｅ?ＩｇＧ２ｂ?同型对照?Ｂ．ＰＥ?ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ?ＣＤ?１３３??图１－２流式细胞术检测ＣＮＥ２细胞中ＣＤ１３３的表达水

?ｌｅｅｅｅｅｅｈｉｉｅ?ＩＴ）??图１－５?ＲＴ－ｑＰＣＲ检测ＣＮＥ２和ＣＮＥ２Ｓ干性相关转录因子（Ａ：扩増曲线Ｂ：融解曲线）??Ｆｉｇ．?１－５?ＲＴ－ｑＰＣＲ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｓｔｅｍ－ｒｅｌａｔｅｄ?ｇｅｎｅｓ?ｉｎ?ＣＮＥ２?ａｎｄ?ＣＮＥ２Ｓ（?Ａ：?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｐｌｏｔ；??Ｂ：?ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ?ｃｕｒｖｅ）??同样，由扩增曲线和融解曲线（图１－５）可知，样品扩增效率高且引物特异??性好，产物单一。采用２＿ＡＡａ法对ＲＴ－ｑＰＣＲ的结果进行分析，结果显示ＣＮＥ２Ｓ??中干性相关转录因子?ｃ－ＭＹＣ（ｔ＝－１．５７５，?Ｐ＝０．０３７）、ＯＣＴ－４（ｔ＝－４．３８９，?Ｐ＝０．０４８）、??ＢＶＨ－１?（ｔ＝－３．２０２，?Ｐ＝０＿０３３）、ＮＡＮＯＧ?（ｔ＝－１６．１５０，Ｐ＝０．００４）的表达在?ＣＮＥ２Ｓ??更高，差异有统计学意义（Ｐ＜〇．〇５）；而?ＳＯＸ－２?（ｔ＝１３．２６２，?Ｐ＝０．００６）、ＫＬＦ－４??１６??


本文编号：3569984