RNAi介导HMGB1基因沉默对下咽癌上皮间质转化和侵袭转移的影响

发布时间：2017-05-16 05:00

本文关键词：RNAi介导HMGB1基因沉默对下咽癌上皮间质转化和侵袭转移的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的研究HMGB1基因对下咽癌细胞上皮间质转化和侵袭转移的影响,并尝试探讨HMGB对于这一过程的调控机制,以期为临床上治疗下咽癌提供新靶点。方法1、利用TGF-β1诱导下咽癌细胞(Fa Du)发生EMT,并通过检索文献[1-2]确定最佳诱导浓度。将Fa Du细胞分为Normal组和TGF-β1组,显微镜下观察Fa Du细胞经TGF-β1诱导后的形态变化。通过细胞免疫荧光实验检测各组细胞中Vimentin、Snail、HMGB1的表达情况,以RT-PCR和Western Blot方法检测HMGB1蛋白和基因在经TGF-β1诱导前后的Fa Du细胞中的表达情况;2、利用脂质体法将siRNA-HMGB1和siRNA-Control转染至FaDu细胞(分为Normal组、Control组和si HMGB1组),用细胞免疫荧光、RT-PCR和Western Blot检测si RNA对HMGB1的抑制作用。采用细胞免疫荧光观察Vimentin、Snail、HMGB1的表达情况,采用RT-PCR方法分析Vimentin、Snail、E-cadherin的表达水平;Western Blot方法分析转染后下咽癌Fa Du细胞中RAGE蛋白表达变化;应用创伤愈合实验检测Fa Du细胞迁移能力的改变,Transwell实验观察HMGB1基因沉默后Fa Du细胞侵袭能力变化。结果1、Fa Du细胞经过TGF-β1诱导后,细胞形态由规则的路砖状转变为长梭形;细胞免疫荧光结果显示,TGF-β1组Fa Du细胞中的Vimentin、Snail表达上调;.2、细胞免疫荧光结果显示,TGF-β1组细胞中的HMGB1表达升高,同时HMGB1在m RNA(P0.01)和蛋白(P0.01)水平的表达也呈现上调现象;3、si RNA-HMGB1转染Fa Du细胞后可在m RNA(P0.05)和蛋白(P0.01)水平抑制HMGB1的表达;4、细胞免疫荧光结果显示,转染siRNA-HMGB1后细胞中的Vimentin、Snail表达水平降低;5、RT-PCR结果显示,转染si RNA-HMGB1后细胞中的Vimentin(P0.05)、Snail(P0.01)基因表达下调,而E-cadherin(P0.05)表达上调;6、Western Blot结果显示,转染si RNA-HMGB1后细胞中的RAGE蛋白表达下调(P0.01);7、创伤愈合实验结果显示,si RNA-HMGB1转染Fa Du细胞后,Fa Du细胞的迁移能力显著下降;8、Transwell实验结果显示,si RNA-HMGB1转染Fa Du细胞后,Fa Du细胞的侵袭能力明显降低(P0.01)。结论1、可以通过TGF-β1诱导构建下咽癌细胞的EMT模型,HMGB1的表达与下咽癌细胞EMT形成相关;2、利用RNAi技术沉默HMGB1的表达可逆转下咽癌细胞EMT;3、利用RNAi技术沉默HMGB1的表达后,下咽癌细胞Fa Du的侵袭转移能力明显受抑;4、HMGB1可通过与RAGE相互作用调控下咽癌的侵袭转移;5、HMGB1基因可能为临床治疗下咽癌提供新的分子靶点。
【关键词】：下咽癌 HMGB1 EMT 侵袭转移
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.63
【目录】：

前言4-5
中文摘要5-7
Abstract7-10
英文缩略词表10-13
第一章综述13-19
1.1 下咽癌的研究进展13
1.2 EMT概述13-16
1.2.1 EMT的发现与分型13-14
1.2.2 EMT与肿瘤细胞侵袭转移14-15
1.2.3 参与EMT的信号通路15-16
1.2.4 EMT与肿瘤干细胞16
1.3 HMGB1的研究进展16-17
1.4 RNAi技术及其在肿瘤研究中的应用17-18
1.5 研究目的及可行性18-19
第二章材料与方法19-37
2.1 实验材料19-22
2.1.1 研究对象19
2.1.2 实验仪器及材料19
2.1.3 主要实验试剂19-21
2.1.4 主要试剂的配制21-22
2.2 实验方法22-37
2.2.1 HMGB1表达与下咽癌细胞EMT相关性的研究22-28
2.2.2 RNAi沉默HMGB1基因对下咽癌EMT的影响28-33
2.2.3 RNAi沉默HMGB1基因对Fa Du细胞侵袭迁移行为的影响33-36
2.2.4 RNAi沉默HMGB1基因对RAGE表达的影响36-37
第三章实验结果及分析37-49
3.1 HMGB1与下咽癌细胞EMT相关性的研究37-40
3.1.1 下咽癌EMT模型建立37-38
3.1.2 检测HMGB1在下咽癌Fa Du细胞中的表达38-40
3.2 RNAi沉默HMGB1基因对下咽癌EMT的影响40-44
3.2.1 Fa Du细胞瞬时转染效率40-41
3.2.2 si RNA对Fa Du细胞中的HMGB1基因表达的影响41-42
3.2.3 Fa Du细胞中的HMGB1基因对下咽癌EMT的影响42-44
3.3 RNAi沉默HMGB1基因对FaDu细胞侵袭迁移行为的影响44-47
3.3.1 创伤愈合实验检测转染后FaDu细胞侵袭能力的改变44-46
3.3.2 Transwell检测转染后Fa Du细胞侵袭能力的改变46-47
3.4 RNAi沉默HMGB1基因对RAGE表达的影响47-49
第四章讨论49-53
4.1 HMGB1表达与下咽癌细胞EMT相关性的研究49-50
4.2 RNAi沉默HMGB1基因对下咽癌EMT的影响50
4.3 RNAi沉默HMGB1基因对FaDu细胞侵袭迁移行为的影响50-51
4.4 RNAi沉默HMGB1基因对RAGE表达的影响51-53
第五章结论53-54
参考文献54-60
作者简介及科研成果60-61
致谢61

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