SD大鼠下丘的蛋白提取和分析

发布时间：2017-06-12 07:10

  本文关键词：SD大鼠下丘的蛋白提取和分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：研究听觉传导通路中下丘(Inferior colliculus, IC)的蛋白质表达情况,找出下丘区域特异性蛋白,并进一步分析其基因组成,以及各基因间的相互关系,从而探索IC在中枢听觉信息整合及处理中的作用及机制,为进一步研究中枢听觉处理障碍(Central auditory processingdi sorders,CAPD)的发病机制提供一定的理论基础。方法：对出生后60天体重230g左右的雄性SD大鼠的IC、耳蜗核(Cochlear Nucleus, CN)、上橄榄核复合体(Superior Oliver Complex, SOC)、端脑包括大脑皮层和小脑(Rest)这四个区域细胞质和细胞膜的蛋白质组学进行研究。(1)细胞质蛋白采用荧光差异双向电泳技术(Two dimension difference gel electrophoresis,2D-DIGE)进行分离。(2)细胞膜蛋白采用同位素标记相对和绝对定量(isobarictagsfor relative and absolute quantitation, iTRAQ)的方法进行鉴定。采用质谱分析对各蛋白点进行定性定量分析,找出IC区域特异性蛋白,再对其进行基因本体(Gene Ontology, GO)分析、京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG)通路分析以及蛋白质相互作用(protein-protein interaction, PPI)分析,探索这些区域特异性蛋白的功能以及其在各通路中所起的作用,筛选出听觉处理障碍相关的目标蛋白。结果：本实验最终通过2-D DIGE方法供检测出4种IC区域特异性细胞质蛋白,通过iTRAQ的方法共检测出53种IC区域特异性膜蛋白。通过对这些蛋白进行GO分析发现IC区域特异性蛋白主要起到了转运及蛋白定位,进而调节神经元生长发育以及信息整合的作用。通过KEGG通路分析的方法对这些区域特异性蛋白所参与的通路进行分析,可以看出其主要参与氧化磷酸化(Oxidativephosphorylation) ,兴奋性突触(Glutamatergic synapse)、抑制性突触(GABAergic synapse).通过蛋白质相互作用分析,发现CaMK2D,SV2A这两种蛋白主要起到调节兴奋性、抑制性神经递质传导及释放功能。结论：(1)IC区域特异性蛋白主要参与兴奋性突触、抑制性突触,维持兴奋性-抑制性神经递质平衡可能是IC进行听觉处理、信息整合的关键。(2) CaMK2D,SV2A在IC中表达水平增高,二者起到维持下丘兴奋性-抑制性神经递质平衡的作用,这也是IC进行信息整合的基础。蛋白质组学研究是基础性研究,需进一步进行功能验证其与CAPD的关系。
【关键词】：中枢听觉处理 下丘 蛋白质组学 荧光差异双向电泳 同位素标记相对和绝对定量
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R764
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 引言9-11
• 材料与方法11-19
• 结果19-30
• 讨论30-36
• 结论36-37
• 参考文献37-41
• 文献综述41-57
• 参考文献50-57
• 附录1.攻读学位期间发表论文情况57-58
• 附录2.致谢58

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

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中国硕士学位论文全文数据库 前1条

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本文编号：443539