miR-375对Hep-2细胞生物学行为的影响及机制研究

发布时间：2017-07-16 01:14

  本文关键词：miR-375对Hep-2细胞生物学行为的影响及机制研究

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【摘要】：目的:喉癌是头颈部常见的恶性肿瘤之一,近年来喉癌的发病呈现出年轻化及上升趋势。本研究以人喉癌细胞系为研究对象,分析转染miR-375对Hep-2细胞生物学行为的影响,并探讨其可能的分子机制。方法:本实验研究设为miR-375 mimics组(转染miR-375)、miR-NC组(转染无义序列miR-NC)和空白对照组(未转染);采用脂质体Lipofectamine?2000将miR-375及miR-NC瞬时转染Hep-2细胞;荧光显微镜,观察GFP荧光细胞数,检测转染效率;采用MTT法,检测细胞生长增殖速度变化;运用流式细胞仪,检测细胞周期及凋亡;通过划痕试验,观察细胞迁移能力;利用生物信息学软件,预测miR-375可能调控的靶基因;采用RT-PCR及Western Blot方法,分别从mRNA及蛋白质表达水平,检测IGF1R基因的表达。结果:miR-375导入Hep-2细胞,荧光检测显示,miR-375可在miR-375 mimics组Hep-2细胞高表达;MTT检测显示,miR-375 mimics组Hep-2细胞生长增殖速度减慢,低于miR-NC组和空白对照组;流式细胞仪检测结果显示,miR-375 mimics组Hep-2细胞处于亚G0/G1期细胞数目增加,高于miR-NC组和空白对照组;miR-375 mimics组Hep-2细胞凋亡增加,高于miR-NC组和空白对照组,差异具有统计学意义(P0.01);划痕试验结果显示,miR-375 mimics组Hep-2细胞迁移能力较miR-NC组和空白对照组降低,差异具有统计学意义(P0.01);生物信息学TargetScan及Pic Tar软件预测分析,提示miRNA调控的靶基因可能是IGF1R基因;RT-PCR及Western Blot检测结果均显示,miR-375 mimics组Hep-2细胞IGF1R表达水平降低,低于miR-NC组和空白对照组,差异具有统计学意义(P0.01)。结论:1、miR-375导入Hep-2细胞,Hep-2细胞生长增殖减慢,细胞阻滞在G0/G1期,细胞凋亡增加,迁移能力下降。2、miR-375导入Hep-2细胞,Hep-2细胞的IGF1R基因表达降低。
【关键词】：喉癌 miR-375 IGF1R Hep-2细胞
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.65
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 第1章 引言10-14
• 第2章 实验材料与方法14-22
• 2.1 实验材料14-15
• 2.2 实验方法15-21
• 2.3 统计学分析21-22
• 第3章 实验结果22-32
• 3.1 转染后GFP及miR-375的表达情况22
• 3.2 miR-375对Hep-2 细胞生长增殖速度的影响22-23
• 3.3 miR-375对Hep-2 细胞细胞周期的影响23-24
• 3.4 miR-375对Hep-2 细胞凋亡的影24-25
• 3.5 miR-375对Hep-2 细胞迁移能力的影响25-27
• 3.6 miR-375与IGF1R基因mRNA的相关性27
• 3.7 高表达miR-375后IGF1R基因mRNA的表达情况27-29
• 3.8 高表达miR-375后IGF1R基因蛋白的表达情况29-32
• 第4章 讨论32-36
• 4.1 miR-375对Hep-2 细胞生物学行为的影响32-33
• 4.2 miR-375对Hep-2 细胞生物学行为影响的分子机制33-36
• 第5章 结论36-38
• 参考文献38-44
• 综述 miRNA在头颈肿瘤的研究进展44-52
• 参考文献49-52
• 硕士期间科研情况52-54
• 致谢54

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