幽门螺杆菌感染在非酒精性脂肪肝病发生发展中的作用

发布时间：2018-10-16 10:42

【摘要】：背景和目的:近年来,非酒精性脂肪肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的全球患病率随着人们生活水平的提高及生活方式的转变逐年上升。大量研究表明,NAFLD与肥胖、高脂血症及糖尿病等慢性疾病密切相关,其对人类身体健康及生活质量带来极大的威胁是显而易见的。然而,NAFLD发病机制目前仍不清楚,且治疗手段也极为有限。因此,明确NAFLD的病因及早期预防尤为重要。幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是一种革兰阴性微需氧菌,其全球人群感染率很高,是人类最常见的胃肠道感染性病原体之一,已被公认是胃肠道疾病包括慢性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关性淋巴组织(MALT)淋巴瘤及胃癌等重要的环境致病因素。随着研究的不断深入,越来越多的临床资料表明Hp感染也可能与多种胃肠外疾病包括血液系统疾病、心血管疾病及代谢类疾病等有关。近来不少研究报道Hp感染可能与NAFLD的发生发展密切相关。NAFLD作为代谢综合症(metabolism syndrome,MS)在肝脏的表现之一,胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)介导的肝脏脂肪异位沉积为其致病的中心环节。大量研究表明Hp感染在IR发生中发挥着极为重要的作用。因此,Hp持续感染是否会引发NAFLD?高脂饮食作为NAFLD重要的环境致病因素与Hp感染是否具有协同作用导致NAFLD?如果Hp感染会导致NAFLD的发生,其可能的致病机制是什么?这一系列问题仍有待进一步研究。材料与方法:1.建立Hp(SS1、NCTC11637)标准菌株感染C57BL/6小鼠的动物模型,分别给予普通饮食和高脂饮食。2.检测不同饮食干预24周后Hp感染组和非感染组小鼠的体重、血脂及肝酶的水平。应用全自动生化仪检测血脂包括总胆固醇(total cholesterol,T-CHOL)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL-C)、甘油三酯(triglyceride,TG),及肝功能转氨酶包括天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)和丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)。3.于不同饮食干预24周后处死动物,分离肝脏组织,称重,并计算质量指数,HE染色观察肝脏组织形态学改变,并采用NAS评分系统对肝脏组织脂肪变性及炎症情况进行评分,油红O染色直接观察肝脏组织脂肪沉积情况,并采用甘油三酯试剂盒法对肝脏组织甘油三酯含量进行定量检测。4.采用Western blot法测定肝脏组织IRS/PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达;采用Real-time PCR方法检测肝脏组织脂肪合成相关酶(PPARγ,FASN,SREBP1)的mRNA水平。结果:1.不同饮食干预后Hp感染对C57BL/6小鼠体重及血生化指标的影响(1)高脂饮食组小鼠体重明显高于普通饮食组(p0.01),而Hp感染组与非感染组间小鼠体重无差异(p0.05)。(2)高脂饮食组小鼠血浆LDL-C明显高于普通饮食组(p0.01),其中高脂饮食中HpSS1感染组小鼠血浆LDL-C也明显高于非感染组(p0.01);而普通饮食中Hp感染组与非感染组无明显差异(p0.05)。(3)高脂饮食组小鼠血浆T-CHOL明显高于普通饮食组(p0.01),而Hp感染组与未感染组间小鼠血浆T-CHOL无明显差异(p0.05);无论是高脂饮食组与普通饮食组间还是Hp感染组与非感染组间小鼠血浆TG均无明显差异(p0.05)。(4)高脂饮食组中HpSS1感染亚组血清ALT较普通饮食组中HpSS1感染亚组明显增大(p0.01);在高脂饮食中HpSS1感染组小鼠血清ALT较非感染组明显增大(p0.01);而普通饮食中Hp感染组血清ALT与非感染组比无明显差异(p0.05)。高脂饮食组小鼠血清AST与普通饮食组比无明显差异(p0.05);无论是高脂饮食组与普通饮食组间Hp感染组与未感染组间血清AST均无明显差异(p0.05)。2.不同饮食干预后Hp感染对C57BL/6小鼠肝脏脂肪含量的影响(1)高脂饮食组小鼠肝脏重量与普通饮食组比无明显差异(p0.05),高脂饮食组中HpSS1感染组与非感染组比也无明显差异(p0.05)。(2)高脂饮食组肝脏组织HE染色可见弥漫分布的脂滴,而普通饮食组未见明显异常,且高脂饮食组中HpSS1感染组与非感染组比肝脏细胞脂滴更大数量更多,NAS评分具有明显差异(p0.01)。(3)肝脏组织油红O染色后可见高脂饮食组小鼠较普通饮食组比脂质累积更明显,且高脂饮食组中HpSS1感染组较非感染组也更明显。(4)高脂饮食组小鼠肝脏TG含量明显高于普通饮食组(p0.01),且高脂饮食中HpSS1感染组较非感染组比明显增高(p0.05);而普通饮食组中Hp感染组与非感染组无明显差异(p0.05)。3.不同饮食干预后Hp感染对C57BL/6小鼠肝组织IRS/PI3K/Akt信号通路及肝脏组织脂肪代谢关键酶表达的影响(1)单纯高脂饮食组或单纯HpSS1感染组与对照组比小鼠肝组织p-Akt(Ser473)的表达均无明显差异(p0.05),而高脂饮食联合HpSS1感染组与对照组比显著下降(p0.01)。(2)单纯高脂饮食组或单纯HpSS1感染组小鼠肝组织IRS1的表达与对照组比无明显差异(p0.05);且高脂饮食联合HpSS1感染组较对照组比也无明显差异(p0.05)。(3)单纯高脂饮食组或单纯HpSS1感染组小鼠肝组织p-IRS1(Tyr896)的表达与对照组比无明显差异(p0.05);而高脂饮食联合HpSS1感染组较对照组小鼠肝组织p-IRS1(Tyr896)的表达显著下降(p0.01)。(4)单纯高脂饮食组或单纯HpSS1感染组与对照组比,小鼠肝脏组织PPARγ、SREBP1及FASN的mRNA表达水平均无明显差异(p0.05),而高脂饮食联合HpSS1感染组小鼠肝脏PPARγmRNA表达水平明显高于对照组(p0.01)。肝脏SREBP1及FASN的mRNA表达水平在高脂饮食联合Hp感染组中较对照组有明显增高的趋势。结论:1.在高脂饮食条件下Hp感染可进一步加重NAFLD。2.Hp感染联合高脂饮食导致NAFLD与抑制肝脏组织IRS-1/PI3K/Akt信号通路有关。
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【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R575.5

【参考文献】