非酒精性脂肪性肝炎大鼠内毒素血症与肠粘膜上皮细胞凋亡关系的研究

发布时间：2019-02-19 15:49

【摘要】：非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)是指除乙醇，肝炎病毒，药物等其他明确的肝损伤因素外，以弥漫性肝脏脂质蓄积，伴或不伴炎症为主要病理特征的一系列疾病的统称，包括单纯性脂肪肝，非酒精性脂肪性肝炎，肝纤维化，肝硬化，肝细胞癌，另外还包括一些严重并发症如急性肝衰竭等。非酒精性脂肪性肝病目前已经成为发达国家慢性肝病以及隐源性肝硬化的主要病因，其发病率和死亡率呈现逐年增长的趋势。单纯性脂肪肝是一个可逆的过程，而非酒精性脂肪性肝炎则是单纯性脂肪肝发展为肝硬化的必经途径，研究非酒精性脂肪性肝炎的发病机制并阻碍其向肝硬化过程发展过程是目前亟不可待的任务。近年来，肠源性内毒素血症引发肝细胞一系列炎症打击损伤的研究越来越炙手可热，在单纯性脂肪肝进展为肝炎过程中扮演着重要角色。肠源性内毒素血症的发生与各种因素相关，各种原因引起的肠道菌群失调，肠道细菌过度生长，肠粘膜屏障功能损伤，最终导致细菌移位形成肠源性内毒素血症。革兰氏阴性杆菌细胞壁的主要成分LPS是肠源性内毒素的主要成分，经肝脏枯否细胞的模式识别受体识别后介导LPS-CD14-TLR4信号通路诱导炎症细胞因子包括TNF-α、IL-6等的大量表达，造成肝脏损伤。肠粘膜屏障功能损伤的早期表现即为肠粘膜通透性的增高，肠粘膜通透性作为联系肠道毒素与肝脏的桥梁起了至关重要的作用。肠粘膜通透性改变与许多疾病相关，如酒精性脂肪性肝病，炎症性肠病，急性胰腺炎，慢性肾功能衰竭，肺间质纤维化等，非酒精脂肪性肝病也有相关文献。酒精直接损伤，氧化应激，肠道缺血再灌注等许多因素均能打破肠粘膜细胞凋亡和增殖之间的相互平衡，引起肠道上皮细胞凋亡增加，细胞间紧密连接完整性破坏等造成肠粘膜通透性增加，近年来关于酒精性肝病，炎症性肠病等肠道上皮凋亡与肠道通透性的研究越来越多，但关于非酒精性脂肪性肝炎肠道上皮细胞凋亡的研究还比较少，因此本实验研究非酒精性脂肪性肝炎大鼠内毒素的形成是否与肠粘膜上皮细胞凋亡及肠粘膜通透性有关。目的：应用高脂饮食构建大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型，测定末端回肠上皮细胞凋亡水平、肠粘膜通透性水平和血清内毒素的水平，了解它们之间的相关性。方法：雄性Sprague-Dawley大鼠20只，平均体重为180±20g，自由喂养1周后随机分为2组：①对照组10只，给予标准基础饲料喂养；②模型组10只，给予高脂饲料喂养（88%普通饲料+2%胆固醇+10%猪油）；实验动物均分笼饲养于25±2℃、明暗各12h的动物实验室内，自由进食和饮水。每周记录动物体重1次，连续进行至24周末，处死所有大鼠。完整切除肝脏，观察肝脏的大体情况，称取肝脏湿重；采用全自动生化分析仪测定血清谷丙转氨酶（ALT），谷草转氨酶(AST)和甘油三酯(TG)水平；采用鲎试剂法测定血清内毒素水平；HE染色观察肝脏组织和末端回肠黏膜病理学变化，并对肝脏组织进行NAS炎症积分；采用分光光度法测定血清D-乳酸水平；制作末端回肠组织石蜡切片应用TUNEL方法测定肠道上皮细胞凋亡情况。结果：①喂饲24周末时，大鼠肝组织HE染色结果显示：模型组大鼠出现明显的肝细胞脂肪变、气球样变和部分炎症细胞浸润，证实了给予高脂饮食成功建立了非酒精性脂肪性肝炎大鼠模型。②大鼠体重、肝湿重和肝指数(肝湿重/体重×100%)：24周末称重，模型组大鼠的体重、肝重、肝指数较对照组均明显增高（567.60±18.89vs460.71±14.71,19.68±2.68vs11.53±0.98,3.47±0.43vs2.5±0.12, P0.05）。③血清生化指标：模型组血清ALT, AST, TG水平较对照组水平明显增高(103.44±8.41vs39.10±9.37,276.95±25.06vs145.37±15.19,0.93±0.14vs0.54±0.10, P0.05)。④模型组血清内毒素水平较对照组相比显著增高（0.3600±0.0293vs0.1747±0.0121, P 0.05）。⑤血清D-乳酸水平：模型组大鼠血清D-乳酸水平较对照组相比显著增高（0.375±0.0353vs0.182±0.0107, P0.05）。⑥肝脏组织病理学特点：对照组大鼠未见肝细胞脂肪变或气球样变，少数大鼠肝组织光镜下可见少量炎性细胞浸润；模型组大鼠肝细胞内均可见充满大量脂肪空泡，，肝细胞气球样变，亦可见到程度不等的小叶内炎细胞浸润，汇管区炎细胞浸润和点灶状坏死，NAS积分与正常组相比有显著性差异（6.90±0.57vs0.70±0.48, P0.05）。⑦末端回肠粘膜病理学改变：对照组大鼠末端回肠黏膜各层结构完整，绒毛排列整齐紧密有序，上皮细胞形态未见明显异常，未见黏膜充血水肿或炎性细胞浸润；模型组大鼠末端回肠小肠绒毛疏松，部分萎缩，断裂缺损，黏膜上皮细胞脱落，粘膜层部分可见水肿和炎性细胞浸润。⑧末端回肠上皮细胞凋亡指数模型组较对照组相比明显增高（0.609±0.071vs0.407±0.037, P0.05）。⑨Pearson’s相关性分析分析上皮细胞凋亡指数与血清D-乳酸没有显著正相关，有一定相关性，r=0.488；凋亡指数与血清内毒素水平有一定相关性，r=0.397；血清D-乳酸水平与血清内毒素水平呈显著正相关，r=0.954,P0.05。结论： 1NASH大鼠存在肠源性内毒素血症和肠粘膜屏障功能的损伤。 2肠粘膜上皮细胞凋亡增加可能参与了肠粘膜屏障的损伤，进一步加重了肠源性内毒素血症，导致NASH的发生和进展。
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【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R575.5

【参考文献】