英夫利西单抗治疗克罗恩病黏膜愈合的血清差异蛋白质表达研究

发布时间：2020-02-18 19:03

【摘要】：目的:寻找与英夫利西单抗(infliximab,IFX)治疗克罗恩病(Crohn’s disease,CD)黏膜愈合(mucosal healing,MH)相关的血清蛋白质生物标志物。方法:采集7例经IFX治疗获得MH的CD患者治疗前(0周,A组)和治疗后(14周,B组)的血清,以及7例未获得MH的CD患者(0周为C组,14周为D组)的血清。采用荧光标记双向差异凝胶电泳的方法,比较A组与B组之间、C组与D组之间、A组与C组之间以及B组与D组之间的蛋白质组学差异,并对差异表达的蛋白质斑点进行基质辅助激光解吸/电离飞行时间串联质谱初步鉴定和生物信息学分析。结果:(1)A组与B组、C组与D组、A组与C组以及B组与D组之间比较分别存在36、3、10和31个差异表达的蛋白质斑点,共计存在44个显著差异表达的蛋白质斑点。(2)上述各组之间的差异斑点分别初步鉴定出17、2、2和15种蛋白质,共计存在19种差异表达的蛋白质,包括载脂蛋白E、载脂蛋白A-I、补体因子H等。(3)基于STRING数据库绘制了蛋白质网状功能图。结论:IFX治疗获得MH的CD患者治疗前后的血清蛋白质表达谱存在差异,获得MH和未获得MH的患者血清表达谱亦存在差异,其中19种蛋白质有可能成为预测CD患者使用IFX获得MH的生物标志物。
【图文】：

蛋白质,比较鉴定,斑点,质谱分析

．2凝胶图像差异分析经DeCyder6.0软件处理后Cy2、Cy3和Cy5染色在图像中分别为蓝色、绿色和红色。经DeCyder6.0软件分析检测到1505±177个蛋白质斑点，获得的凝胶间匹配率为72.0%±0.2%。以斑点平均体积差异大于1.5倍(表达差异上调或下调1.5倍)，t检验P＜0.05的蛋白质点为有显著差异的蛋白质点，经软件统计分析，A组与B组之间、C组与D组之间、A组与C组之间以及B组与D组之间比较分别存在36、3、10和31个差异表达的蛋白质斑点，共计发现44个显著差异表达的蛋白质斑点。显著差异的蛋白斑点在2D-DIGE凝胶上的具体位置见图2。Figure2．Mergedimageof2D-DIGE．图2融合的2D-DIGE凝胶图像3质谱分析结果差异表达的44个蛋白质点进行MALDI-TOF/TOF-MS质谱分析，以Mascot得分≥56分认为是可信结果，共鉴定出与27个差异点对应的19种蛋白质，见表2。A组和B组比较鉴定出与25个差异点相对应的17种差异蛋白质，其中在B组上调表达的蛋白有6种，包括中心体蛋白57kD样1(centrosomalprotein57kD-like1，CEP57L1)、角蛋白2e(keratin，typeIIcytoskeletal2epidermal，CK-2e)、白蛋白(albumin，ALB)、载脂蛋白E(apolipoproteinE，APOE)、载脂蛋白A-I(apolipoproteinA-I，APOA1)和甲基化CpG结合域蛋白4(methyl-CpG-bindingdomainprotein4，MBD4)，在B组下调表达的蛋白有11种，，包括补体因子H(complementfactorH，CFH)、铜蓝蛋白(ceru-loplasmin，CP)、α1-抗胰蛋白酶(alpha-1-antitrypsin，SEＲPINA1)等。C组和D组比较鉴定出与3个差异点对应的2种差异蛋白质，CEP57L1和ALB均在D组上调表达;A组和C组比较鉴定出与2个差异点相对应的2种差异蛋白，Mago-Nashi同源蛋白(Mago-Nashiho-mologprotein，MAGOH)在A组上调表达，触珠蛋白(haptoglobin，HP)?

【参考文献】