Th17细胞及相关细胞因子在非酒精性脂肪肝大鼠模型中的表达

发布时间：2017-03-20 18:03

  本文关键词：Th17细胞及相关细胞因子在非酒精性脂肪肝大鼠模型中的表达，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：【目的】 以高脂饮食建立大鼠非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)模型，观察在NAFLD发展中T辅助细胞17(the help17cells,Th17)、维甲酸相关孤儿核受体mRNA(retinoic acid-related orphan receptorγt,RORγtmRNA)、白介素6(Interleukin-6,IL-6)、白介素17(Interleukin-17,IL-17)的表达情况，探讨Th17及相关细胞因子在NAFLD发病机制中的免疫学作用。 【方法】 雄性SD大鼠64只，体重160±10g，适应性喂养1周后按随机原则分为正常饮食对照组(normal diet group,NG)和高脂饮食组(fat-rich diet,FG)，每组32只。对照组以普通饲料喂养，高脂组以高脂饲料喂养(88％普通饲料+2％胆固醇+10％猪油)。分别于实验第2、6、10、14周末随机抽取两组大鼠各8只，禁食12小时后称重，麻醉后下腔静脉取血，用全自动生化分析仪测定AST、ALT、TG、TC。流式细胞术检测大鼠外周血Th17细胞占CD4+T细胞的比例。取出肝脏并称其湿重，计算肝指数，观察肝脏的颜色、质地，取部分肝组织固定于10%的中性甲醛溶液中以备HE染色，观察大鼠肝脏组织病理变化情况。剪取少许肝组织，用Real-time PCR检测肝脏RORγt mRNA的表达情况。酶联免疫吸附分析法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清及肝匀浆中IL-6、IL-17的含量。使用SPSS11.5统计软件处理实验数据，计量资料采用独立t检验，计数资料采用秩和检验，两因素相关性用pearson相关分析，p0.05认为有统计学差异。 【结果】 1、总体上，高脂组大鼠增长较快。第2周末时即出现肝湿重、肝指数较同期正常对照组显著升高(p值均0.000)，2组大鼠体重在第6周末显示出统计学差异(p=0.001)。 2、HE染色显示对照组大鼠肝脏脂肪变及炎症病变均为阴性，高脂组大鼠的脂肪变及炎症程度随造模时间的延长而逐渐加重。高脂组在2周末出现1级脂肪变，以小泡性为主；第6周末小泡脂肪变继续加重，并出现大泡性脂肪变，脂肪变达2-3级，且肝内开始出现炎性病灶，炎症分级达0-1级；第10周末脂肪变及炎症病变均加重，分别处于3-4级和2-3级；第14周末脂肪变达4级，且以大泡性为主，炎症已达到3级。与同期正常对照组比较，，高脂组的脂肪变均有显著差异(p分别为0.002，0.000，0.000，0.000)，炎症在6周末时出现显著差异(p分别为1.000，0.010，0.000，0.000)。 3、高脂组大鼠血清ALT、AST、TG、TC均高于同期正常对照组，TC在第2周末出现统计学差异(p=0.023)， ALT在第6周末出现统计学差异(p=0.046),AST、TG在第10周末出现显著差异(p分别为0.001，0.000)。 4、我们观察到高脂组血清及肝匀浆的IL-6、IL-17浓度均高于对照组。血清IL-6和IL-17水平分别在第6、10周末出现显著差异(p分别为0.000，0.003)。而肝匀浆的IL-6、IL-17水平则分别在第2、6周末显著高于对照组(p分别为0.003，0.000)。 5、流式细胞术检测外周血Th17细胞占CD4+T细胞的比例显示：对照组间的比例基本相同，高脂组间比例则逐渐增加。在第10周末对照组显著低于高脂组(各时段p分别为：0.397，0.900，0.000，0.000)。 6、QRT-PCR检测肝组织RORγt mRNA的表达：同期高脂组的表达量显著高于对照组(p分别为0.122、0.192、0.002、0.000)。 7、高脂组相关分析显示： IL-6、IL-17的血清浓度与肝匀浆浓度成明显正相关(r=0.921,p=0.000;r=0.877,p=0.000)；Th17细胞占CD4+细胞的比例与细胞因子IL-6、IL-17的表达成正相关(r分别为0.824，0.734)；外周血Th17细胞和血清、肝组织中IL-6、IL-17的表达量随着肝脂肪变(r分别为0.693，0.898，0.801)、炎症程度(r分别为0.664，0.907，0.823)的加重而升高，其中IL-6、IL-17与肝脏病变的关系最强。 【结论】 1、持续高脂饲料喂养导致大鼠肝脏脂肪变、肝脏炎症持续加重，进而形成NASH。 2、Th17、IL-17和IL-6三者间密切相关，三者与肝脏病变程度成正相关，三者可能参与了NAFLD的发生、发展且Th17细胞可能通过IL-6、IL-17等细胞因子间接推进NAFLD的发展。 3、检测外周血IL-6、IL-17的浓度可能有助于NAFLD的诊断和判断其严重程度。
【关键词】：非酒精性脂肪性肝病 大鼠 Th17细胞 IL-6 IL-17
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R575.5
【目录】：

• 中英文缩略词表4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-12
• 材料和方法12-21
• 第一节材料12-14
• 第二节方法14-21
• 结果21-37
• 讨论37-42
• 结论42-43
• 参考文献43-47
• 致谢47-48
• 综述48-55
• 参考文献52-55

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 陆喜燕;董国庆;钟丽华;李坚旭;甘海琼;龙峰;;单纯性肥胖患儿非酒精性脂肪肝病与胰岛素抵抗[J];实用儿科临床杂志;2012年11期

2 高占娟;胡晓娜;保志军;;高血压合并非酒精性脂肪肝的流行病学[J];医学综述;2011年16期

  本文关键词：Th17细胞及相关细胞因子在非酒精性脂肪肝大鼠模型中的表达，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：258189