光动力疗法在食管静脉曲张治疗中的应用：基础研究、动物实验和临床初探

发布时间：2020-03-31 05:32

【摘要】： 食管静脉曲张经内镜治疗曲张静脉消失后，若门脉高压仍存在，就会在食管内壁逐渐出现一些再生的小静脉，成为远期再出血的根源。再生的小静脉纤细、迂曲，很难用硬化剂注射、套扎或组织胶粘合治疗方法，如何解决这一问题是防治远期再出血的关键问题之一。本研究采用光动力疗法，观察培养的血管内皮细胞在光动力作用后的改变，进而采用光动力疗法对小静脉进行封闭，并与硬化剂注射方法进行比较，探讨光动力疗法在食管静脉曲张治疗中的潜在价值。 ECV304人脐静脉血管内皮细胞系，用含10％胎牛血清的DMEM培养基进行培养。首先用MTT比色方法筛选出光动力疗法合适剂量，然后采用光动力疗法处理细胞(加入含血啉甲醚10μg／ml的培养液，以15mW／cm~2功率密度混合铜蒸汽激光照射10分钟)，和正常培养细胞进行对照。种植于加盖玻片的6孔板，姬姆萨染色后观察形态学改变；种植于24孔板，连续6天每天取样计数，绘制生长曲线；种植于50cm~2玻璃培养瓶，Annexin Ⅴ-FITC／PI双染后流式细胞仪检测细胞凋亡。 正常内皮细胞呈梭形或多角形，时可见分裂相；光动力作用后细胞变小、变圆，结构不清，胞浆内有空泡，分裂相少，细胞密度减低。正常血管内皮细胞在培养2天后进入指数生长期，表现为S型生长曲线；光动力作用后细胞生长缓慢，2天后细胞开始减少，无指数生长期，表现为低平生长曲线图型。正常血管内皮细胞组凋亡率为4.19％±0.17％；光动力作用组细胞凋亡率为19.69％±2.45％，明显高于正常对照组(P=0.001)。 动物实验以纯种新西兰白兔耳缘静脉为研究对象。试验动物注射血啉甲醚或竹红菌乙素后用铜蒸气激光照射耳缘静脉。选择不同的功率密度、照射时间、光敏剂及其剂量，比较各组兔耳缘静脉血栓形成率，筛选出合适剂量。 在血啉甲醚剂量相同(10mg／kg)时，150mW／cm~2激光照射40min(360J／cm~2)组的血栓形成率为6／7，高于180J／cm~2和240J／cm~2激光照射组(P=0.001，P=0.041)，是光动力疗法封闭小静脉比较合适的条件。激光照 射剂量相同门 J／cm句时，30mgthg血晰甲醚组血栓形成率高于10mg／kg 和20mg／kg组（P＝0刀10，P＝0刀41X但这样大剂量的血淋甲醚并不能用 于临床。 然后设立光动力治疗组门 血淋甲醚，150 mwcmZ功率密度铜 蒸气激光照射40分钟）和单纯注射光敏剂组、单纯激光照射组、硬化剂 注射组3个对照组作为对照。从大体观察、超声探测、活检病理三方面观 察血栓形成情况。活检组织除进行苏木素／伊红染色外还进行维多利亚蓝 弹力纤维特殊染色以重点观察血管壁结构。 实验动物耳缘静脉光动力治疗后照射部位血管血栓形成、血流阻断， 耳缘静脉近心端腔内无血流，跨过血栓部位有侧枝循环形成，4周后血栓 被纤维组织代替，远端血液经侧枝回流。单纯注射光敏剂和单纯激光照射 组耳缘静脉外观均无改变。硬化剂注射组注射后血管立即变成蓝紫色，大 片组织逐渐坏死，4周后坏死组织脱落，耳廓形成巨大缺损。超声微探头 探测显示光动力治疗后，耳缘静脉管腔回声较前升高，，符合血栓形成改变。 单纯注射光敏剂和单纯激光照射组回声无改变。硬化剂注射组为弥漫性无 结构高回声。显微镜下光动力作用后，耳缘静脉血管内皮细胞被破坏，管 腔内血栓形成，维多利亚蓝弹力纤维特殊染色显示内皮细胞被破坏而弹力 纤维仍完整。4周后原血管部位被纤维组织代替。单纯注射光敏剂和单纯 激光照射组组织学无改变。硬化剂注射组镜下为弥漫性坏死改变。光动力 作用组血栓形成率高于单纯注射光敏剂组、单纯激光照射组0刀．015人 与硬化剂注射组无统计学差异（P＝0．467）。 此后选取正常犬进行内镜下光动力疗法，观察光动力疗法对正常食管 粘膜的损伤作用。实验用犬内镜下光动力疗法的实验中，光动力疗法造成 正常食管粘膜的片状糜烂，比临床硬化剂注射形成的溃疡明显要轻。 最后将光动力疗法用于临床，治疗2例食管静脉曲张内镜治疗消失后 出现的再生小静脉。治疗后，再生小静脉明显减少、红色征减轻。 结论：在合适的光敏剂和光照剂量下，光动力作用可有效地杀伤静脉 血管内皮细胞，造成血栓形成，并最终使血管闭合。与硬化剂注射相比较， 光动力疗法效果确切而过程温和。对小静脉良好的封闭作用使光动力疗法 有可能成为食管静脉曲张治疗的新成员。
【图文】：

牢靠(图1一1)，有时可见分裂相，约48小时增殖1倍。图1一1正常血管内皮细胞为梭形或多角形，在倒置显微镜下边缘清楚，附壁牢靠2、激光照射量及HMME浓度与细胞存活率的关系表1一1不同激光照射量及血琳甲醚剂量时细胞存活率血琳甲醚(pg/ml)激光照射时间(功率密度15mw/cm5分钟10分钟P值0(单纯照光)O(单纯给药)100%98.38土0.96%99.12士0.59%95.36土1.58%96.58土3.59%98.27士1.67%90.24土4.22%81.56士4.81%68.39士9.83%49.32士9.53%95.31士4.72%78.04士6.36%71.45士7.86%42.38士14.63%11.05士4.65%0.2140.0040.0020.002<0.0012.551020P值0.061<0.001<0.001单纯光敏剂作用组不同剂量下细胞存活率无统计学差异(P=0.061);光动力作用组激光照射量相同(15mw/cmZxs分钟、10分钟组)不同光敏剂剂量下细胞存活率有统计学差异(P<0.001，P<0.001);单纯激光照射组不同照光时间下细胞存活率无统计学差异(P=0.214);光动力作用组光敏剂剂量相同(2.5一20。g/ml各组)不同照光时间下细胞存活率有统计学差异(P=0.004，P=0.002，P=0.002，P<0.001)。16

胞至IX1Annexin混匀，室时内上机仪，488nm射光点图群体进行)的荧光比率。调行光谱重lQuest功清楚，附空泡，分细胞碎片。可见分裂清，胞浆见细胞碎缩、浓染、
【学位授予单位】：中国人民解放军军医进修学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R571.3

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本文编号：2608640