CTGF特异性小分子干扰RNA对大鼠肝纤维化逆转的影响
发布时间：2020-04-01 15:32
【摘要】：目的本研究通过设计和合成针对抗肝纤维化关键基因的结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)特异性小分子干扰RNA (small interfering RNA, siRNA),并通过细胞转染筛选出高效的CTGFsiRNA抗肝纤维化序列,探讨通过尾静脉注射CTGF siRNA观察对大鼠肝纤维化肝脏功能及肝纤维化指标的影响及是否能抑制大鼠体内肝脏CTGF基因表达防治大鼠肝纤维化。 方法1.参照siRNA设计原则,应用RNA在线设计软件,设计3段RNA干扰候选序列,分别转染正常肝细胞株(L-02),以转染非特异性siRNA(与CTGF mRNA无同源性)作为对照,应用Western Blot检测L-02细胞CTGI蛋白质表达,根据蛋白表达结果筛选出高效的CTGI干扰序列。2.雄性SD大鼠30只,随机分成5组,分别为模型组：腹腔注射40%CCl1 (3ml/kg)及尾静脉注射生理盐水,1次/3d,连续8周；预防组：腹腔注射40%CCl1及尾静脉注射抗CTGF siRNA (0.1mg/kg),1次/3d,连续8周；治疗组：腹腔注射40%CCl1 2周,后给予抗CTGF siRNA及CCl1 6周；晚期治疗组：腹腔注射40%CCl1 4周,后给予抗CTGF siRNA及CCl1 4周；空白对照组：尾静脉注射生理盐水8周。于最后一次CCl1注射3天后取血及组织标本,检测血清转氨酶(ALT、AST)、白蛋白(ALB)、总胆红素(TBIL)及肝纤维化(透明质酸HA、层黏连蛋白LN、人Ⅲ型前胶原hpcⅢ、Ⅳ型胶原Ⅳ.C)指标,应用Real-Time PCR及western-blot印迹法检测CTGF mRNA及蛋白质在大鼠肝组织表达,应用H-E染色检测肝组织炎症及纤维化,参照慢性肝炎分级分期标准对大鼠肝脏炎症活动度及肝纤维化程度进行病理分级。 结果1.与对照相比,转染siRNA的L-02细胞CTGF蛋白表达明显下调,且siCTGF-1、siCTGF-2、siCTGF-3各片段干扰率分别为44.91%、93.99%、81.34%,其中以siCTGF-2干扰率最高,效果最明显。转染非特异性siRNA的L-02细胞CTGF蛋白表达无明显变化(p0.05)。2.与模型组相比预防组及治疗组大鼠肝组织CTGF mRNA及蛋白质表达显著下调(p0.05),肝组织炎症、坏死及纤维化明显减轻,血清转氨酶、肝纤维化指标显著降低。晚期治疗组与模型组相比大鼠肝组织CTGF mRNA及蛋白质表达下调(p0.05),肝组织炎症、坏死及纤维化减轻,血清转氨酶、肝纤维化指标降低,与预防组及治疗组相比大鼠肝组织CTGF mRNA及蛋白质表达相对上调(p0.05),肝组织炎症、坏死及纤维化程度相对增加,血清转氨酶、肝纤维化指标相对升高。 结论不同的CTGF siRNA对L-02细胞CTGF表达水平具有不同的干扰效能,成功合成能高效阻抑CTGF表达的CTGFsiRNA。经尾静脉注射抗CTGF siRNA能显著抑制大鼠体内肝脏CTGF基因表达并能有效防治大鼠肝纤维化,注射越早,越有效的阻止肝纤维化的进展,且对于病程较长的肝纤维化也有一定的治疗作用,提示抗CTGF siRNA将成为抗肝纤维化治疗的新靶点。
【图文】：
次州少、学硕曰){究’!月衬洲仑丈结果TGFsiRNA对L一02细胞CTGF蛋白表达的干扰效果:westemBlot结果纤计算机灰度扫描少尸、内参(p一actill)比较分析显示。转染SICTGF一1、SICTGF一2、SICTGF一3，「士)CJ舌，CTGF蛋白表达分另x!为(53l)、(6.18士().32)、(18.66士1.()9)，与又、l‘}线毛」‘!!t匕，转染siRNAf内L一0TGF蛋自表达明显卜调(p<0.()5)。然后将colltro!(空自对照)红}比值100%，分别得到SICTGF一1、SICTGF一2、SICTGF一3各片段干扰率为44.9侧，、剐.34叹，，工U中以、iCTGF一2厂「扰率最高，效果最明异转染汗特异性SIR一02细胞CTGF蛋白表达无明显变化(p<0.()5)。
染SICTGF一1、SICTGF一2、SICTGF一3，「士)CJ舌，CTGF蛋白表达分另x!为(55.09l)、(6.18士().32)、(18.66士1.()9)，与又、l‘}线毛」‘!!t匕，转染siRNAf内L一02到l}GF蛋自表达明显卜调(p<0.()5)。然后将colltro!(空自对照)红}比值数抓‘{00%，分别得到SICTGF一1、SICTGF一2、SICTGF一3各片段干扰率为44.9!%、，、剐.34叹，，工U中以、iCTGF一2厂「扰率最高，，效果最明异转染汗特异性SIRNA2细胞CTGF蛋白表达无明显变化(p<0.()5)。CTGF窃卿~徽弩;吻(翱膝Co一1trolNC御噢攀siCTGf一l5iCTGF一2siCI’GF一3p一“cti”橄脚翻麒蔡《翩肠翻翻熟绷黛ColltrolNCsiC丁GF一1siCTGF一2siCTGF一3图IL一02细胞CTGF蛋自表达
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R575.2
本文编号：2610639
【图文】：
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【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R575.2
【参考文献】
相关期刊论文 前1条
1 孙鲁琨;王贵波;;肝纤维化机制研究进展[J];西南国防医药;2009年12期
本文编号：2610639
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