大鼠肝细胞GnRH受体的表达及其影响的研究

发布时间：2020-04-02 18:56

【摘要】： 许多研究已经证明促性腺激素释放激素及其受体存在于下丘脑-垂体轴以外的器官和组织,例如胎盘滋养层细胞、前列腺、胰腺及一些肿瘤组织中[1.2.3]。Chegini等[4]首次证明了子宫平滑肌细胞上存在GnRH及其受体的mRNA。我们先前的研究也报道了胃肠胰系统能自身合成GnRH[5],而且证实胃肠胰系统及甲状腺均含有GnRH受体免疫反应阳性物质[6.7]。GnRH在下丘脑-脑垂体轴外生成的同时,其亦发挥生物学效应,Gurrie等[8]发现GnRH可以使胎盘滋养层细胞内[Ca2+]明显升高,进而参与细胞内的信号传递过程。Tache等[9]发现脑室及静脉注射GnRH类似物后,胃液的pH值升高,其作用机制可能是GnRH类似物通过抑制迷走神经而发挥间接的调节作用。 近年来在临床上观察到药理剂量的GnRH类似物可导致糖代谢紊乱,但其发生机制尚不明确,有人认为可能与使用GnRH类似物时机体的性激素改变有关;GnRH对葡萄糖代谢是否存在直接作用未见报道。肝脏是物质代谢的主要器官,同时胃肠胰系统能自身合成GnRH,因此,肝脏细胞是否存在GnRH受体,GnRH是否在GnRH受体介导下对肝糖代谢产生影响是值得关注的问题。 研究方法: 取大鼠肝脏组织制成切片,运用免疫组织化学SABC法和原位杂交技术,观察大鼠肝脏细胞是否存在GnRH受体;用原代培养法培养大鼠肝细胞,GnRH受体免疫组化、糖原染色比较不同浓度葡萄糖培养液对GnRH受体表达的影响。 研究结果: (1):大鼠肝细胞呈GnRH受体免疫反应阳性,阳性反应物质分布在细胞的细胞膜和细胞浆中,细胞核呈阴性反应。一个肝小叶内,靠近中央静脉的肝细胞,其GnRH受体免疫反应较强,着色较深,远离中央静脉的肝细胞,其GnRH受体的免疫反应较弱,着色较浅。(2):大鼠肝细胞GnRH受体的mRNA杂交信号物质呈深棕色,背景不着色,反差明显。信号物质分布于细胞质,细胞核未检测到GnRH受体mRNA杂交信号,呈阴性反应。一个肝小叶内,靠近中央静脉的肝细胞,其GnRH受体mRNA杂交信号较强,着色较深,远离中央静脉的肝细胞,其GnRH受体mRNA杂交信号较弱,着色较浅。(3):用SABC免疫组织化学染色法分别对葡萄糖浓度1g/L、葡萄糖浓度2g/L培养液培养的大鼠肝细胞行GnRH受体的免疫组织化学染色;镜下观察两种葡萄糖浓度培养液培养条件下GnRH受体的表达,用图像分析软件对其进行光密度值分析,结果显示正常葡萄糖浓度(1g/L)培养时肝细胞GnRH受体的表达强度明显高于高糖培养液(2g/L)中肝细胞的表达(P0.01)。 结论: (1)大鼠肝细胞呈GnRH受体免疫反应阳性,又有GnRH受体mRNA杂交信号,说明大鼠肝脏在转录和翻译水平能自身合成GnRH受体,同时此部位GnRH受体的分布具有中央静脉旁肝细胞增多的特点。(2)GnRH受体的表达强度与细胞外液葡萄糖浓度有关,表现为正常葡萄糖浓度培养时肝细胞GnRH受体表达强度明显高于高糖浓度培养,说明高浓度葡萄糖使肝细胞GnRH受体表达下调,提示肠胰系统产生的GnRH可能通过其在肝细胞上的受体调节糖代谢。
【图文】：

图 1 GnRH 基因结构及其与 GnRHR 相互作用模式示意图Fig.1 Structure of GnRH gene and reciprocity between GnRH and GnRHRGnRH 基因结构中的阴影部分为内含子，，1～4 为外显子，aa:氨基酸残基引自： 叶丹、朱睦元等 促性腺激素释放激素的结构及其生物学功能.生物化学与生物物理进展 2003;30(1)49-53

图 1 图 2图 1 GnRH-R 在大鼠肝中的表达. 免疫组织化学染色 SABC 法×200图 2 GnRH-R 在阳性对照大鼠胃中的表达. 免疫组织化学染色 SABC 法×200Fig.1 Expression of GnRH-R in rat liver. Immunohistochemical staining SABC×200Fig.2 Expression of GnRH-R in rat stomach as positive control. Immunohistochemi
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R575

【参考文献】

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本文编号：2612319