PCR-反向点杂交法与DNA直接测序法检测HBV耐药变异与基因型的比较研究

发布时间：2017-03-23 15:00

  本文关键词：PCR-反向点杂交法与DNA直接测序法检测HBV耐药变异与基因型的比较研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的： 用PCR-反向点杂交法和DNA直接测序法两种方法检测乙型肝炎病毒基因耐药位点的突变情况以及基因型,并进行比较分析,进一步证实PCR-反向点杂交法是一种快速,准确发现核苷类药物治疗后耐药位点的检测方法。同时将检测结果与临床资料进行分析,进一步探讨乙型肝炎病毒耐药变异与基因型、肝功能检测指标、HBV DNA病毒载量等的相关性。 方法： 收集102例服用核苷类药物治疗的慢性乙型肝炎患者血清标本,采用PCR-反向点杂交法和DNA直接测序法检测HBV的耐药突变位点以及基因型,并对HBV耐药变异与基因型、肝功能检测指标、HBV DNA病毒载量等指标进行相关性分析。 结果： 1.两种检测方法准确度比较：在102例服用核苷类药物的慢性乙型肝炎患者血清中,PCR-反向点杂交法检出耐药突变株79例,变异率为77.5%；其中180M和204I突变株48例,占60.8%；204V突变株22例,占27.8%；181V突变株9例,占11.4%；HBV基因型中B基因型10例,C基因型84例,D基因型1例。DNA-直接测序法检出耐药变异株84例,其变异率为82.4%,共检出5种变异位点,其中分别为180M和204I突变株50例,占59.5%；204V突变株24例,占28.6%；181V突变株9例,占10.7‰202G1例,占1.2%。其中12份标本为B型,占11.8%；89份标本为C型,占87.3%；1份标本为D型,占0.9%。两种方法的准确度经χ2检验,无统计学意义(P0.05)。 2.两种检测方法灵敏度的比较：HBV DNA水平在1000copies/ml的血清中,PCR-反向点杂交法无法检出突变株；DNA-直接测序法检出耐药突变株5例。在相同HBV DNA检测水平下,PCR-反向点杂交法和DNA直接测序法能同时检出变异株与野生株,两者差异无统计学意义(P0.05) 3.将检测结果与临床资料进行相关性分析：乙肝患者的耐药变异位点与基因型、肝功能指标无相关性(P0.05),与HBV DNA病毒载量有一定相关性(P0.05)。 结论： 1.PCR-反向点杂交法灵敏度和准确度与DNA直接测序法(金标准方法)检测相符率高。 2.PCR-反向点杂交法是一种快速,准确发现核苷类药物治疗后耐药位点的检测方法。 3.检测结果与临床相关性分析,乙型肝炎耐药变异位点与基因型、肝功能检测指标无相关性,而与HBV DNA病毒载量等指标有一定的相关性。
【关键词】：乙型肝炎病毒 耐药变异 基因型 PCR-反向点杂交法 DNA直接测序法
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R512.62;R3416
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• ~.略语10-11
• 前言11-14
• 研究现状、成果11-12
• 研究目的、方法12-14
• 材料与方法14-19
• 1 研究对象14
• 2 方法14-19
• 2.1 主要试剂14
• 2.2 主要仪器14-15
• 2.3 PCR-反向点杂交法检测HBV耐药变异与基因型15
• 2.3.1 HBV DNA的提取15
• 2.3.2 PCR扩增反应15
• 2.3.3 PCR反应条件15
• 2.3.4 杂交15
• 2.3.5 洗膜和显色15
• 2.4 PCR直接测序法检测HBV耐药变异与基因型15-18
• 2.4.1 HBV DNA提取15-16
• 2.4.2 巢式PCR扩增16-18
• 2.5 统计学处理18-19
• 结果19-23
• 1 PCR-反向点杂交法及PCR直接测序法检测结果19-20
• 1.1 PCR-反向点杂交法检测HBV耐药变异与基因型结果19
• 1.1.1 PCR-反向点杂交法结果模式图19
• 1.1.2 PCR-反向点杂交法结果19
• 1.2 PCR-直接测序法检测HBV耐药变异与基因型结果19-20
• 2 两种方法检测结果的比较分析20-21
• 2.1 两种方法变异检出率的比较20-21
• 2.2 两种检测方法在不同HBV-DNA水平变异检出率的比较21
• 3 HBV基因分型与基因变异的相关性结果21-22
• 4 HBV变异与肝功能、HBV DNA病毒载量的关系22-23
• 讨论23-27
• 小结27-28
• 参考文献28-31
• 发表论文和参加科研情况说明31-32
• 综述32-43
• 综述参考文献40-43
• 致谢43

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 王义光,朱武军,杨兴林;贵阳地区乙型肝炎病毒YMDD变异与基因分型[J];中华肝脏病杂志;2005年03期

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本文编号：263944