黄芩苷、苦参碱、小檗碱对NASH大鼠的治疗作用及对L-FABP的影响与机制研究

发布时间：2020-04-26 07:06

【摘要】：非酒精性脂肪性肝炎(NASH)是一种遗传—环境—代谢应激相关性疾病,它可以进展为肝纤维化、肝硬化甚至肝癌等终末期肝病的疾病。其发病机制至今尚未完全阐明,一般认为氧化应激及脂质过氧化损伤是促进脂肪变的肝脏发生炎症、坏死和纤维化的关键因素。因此,临床上应以氧化应激作为靶点来研究和开发治疗NASH的药物,但今尚无确切疗效的药物。一些传统的中药单体在治疗氧化应激相关性疾病方面表现出令人惊异的治疗效果。黄芩苷(BA)、苦参碱(MT)、小檗碱均(BE)作为其中的佼佼者,具有抗炎、抗氧化、抗纤维化、调节免疫机能等作用。近年发现肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)是一种有效的内源性抗氧化物,有望被开发成抗氧化应激的新靶点。本研究旨在通过建立动物模型观察黄芩苷、苦参碱、小檗碱治疗NASH的疗效并研究三种中药单体对L-FABP的影响；通过体外氧化应激模型进一步探讨黄芩苷、苦参碱、小檗碱对L-FABP作用及其可能分子机制。研究方法及结果如下： 1、动物实验建立高脂诱导NASH大鼠模型,给予BA30mg/kg/d, MT36mg/kg/d, BE18mg/kg/d灌胃治疗3周,结果发现经上述三中药单体治疗后能减轻NASH大鼠的体重,但对肝重无影响。肝组织病理学显示三种中药单体能缓解肝细胞脂肪变性,改善炎性细胞浸润、灶状坏死和肝细胞气球样变。血清ALT、AST降低；肝组织SGH、SOD活性升高,MDA减少。Realtime PCR检测发现BA、MT、BE对大鼠肝组织中L-FABP mRNA表达无影响。Western blotting检测发现BA、MT能升高大鼠肝组织L-FABP蛋白水平,而BE对L-FABP蛋白水平无影响。 2、体外实验建立H2O2诱导活性氧(ROS)产生的氧化应激体外模型,构建过表达L-FABP质粒,并转染至Chang肝细胞,流式细胞技术检测过表达L-FABP后,细胞内ROS含量明显减少。MTT法筛选出120μ mol/L以下的BA、67.8μ mol以下的MT、78.2μ mol/L以下的BE持续作用48h内为安全有效浓度。流式细胞技术和Confocal观察细胞内ROS含量,证实50μ mol BA、32μ mol MT、50μ mol BE持续作用48h后减少ROS含量效果最为明显。检测肝细胞内SOD、GSH、CAT的活性,发现50μ mol BA、32μ mol MT、50μ mol BE持续作用48h后能增加细胞内SOD、GSH的活性,减少LDH的产生,但对CAT的活性没有影响。Realtime-PCR检测显示BA、MT、BE不能影响L-FABP mRNA的表达,但BA、MT能升高L-FABP蛋白的水平,而BE对体内L-FABP蛋白水平无影响。随后分别加入蛋白质合成抑制剂放线菌酮(CHX)和蛋白酶体降解抑制剂MG132,结果发现加入CHX继续培养后L-FABP蛋白水平降低,而MG132处理后L-FABP蛋白水平增加明显。结论：以上研究结果显示黄芩苷、苦参碱、小檗碱对NASH大鼠有显著治疗作用。黄芩苷、苦参碱可能通过增强细胞内SOD、GSH的活性,还可能通过提高体内L-FABP的水平发挥抗氧化作用。其机制可能是通过增加该蛋白的稳定性,减少该蛋白的降解来维持细胞内L-FABP高水平。小檗碱可通过增强细胞内SOD、GSH的活性发挥抗氧化作用,但对体内L-FABP的水平无影响。
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R285.5;R575.1

【参考文献】